Legislatívna základňa Ruskej federácie. Sanitárno-helmintologický výskum

Najjednoduchšie sú rozdelené do 4 tried:

Pri encystácii získa mikroorganizmus zaoblený tvar a pokryje sa ochranným plášťom. Vo forme cysty sa prvoky stávajú menej náchylnými na nepriaznivé faktoryživotné prostredie.

Výskum môže zahŕňať:

Poznámka:Existuje veľa druhov diagnostiky, zvážime tie typy, ktoré sú najbežnejšie v klinickej laboratórnej praxi.

Súkromné ​​typy diagnostiky

V každom konkrétnom prípade má laborant za úlohu nájsť konkrétny patogén, niekedy sa spolu s hlavným nájdu aj iné.

V ľudskom čreve je schopných žiť 6 druhov tohto mikroorganizmu. Klinický význam má len dyzentérickú amébu, nachádza sa vo vegetatívnej forme a vo forme cýst.

Okrem toho sa používajú imunologické metódy:

• nepriama imunofluorescencia;
• nepriama aglutinácia (PHA);
• radiálna imunodifúzia.

Poznámka: sérologické metódy sú neinformatívne a používajú sa len ako doplnok k hlavným v pochybných prípadoch.

Diagnóza mihalníc (ciliates)

Patogénnou formou mikroorganizmov tohto rodu je balantidia. Ide o mikrób, ktorý spôsobuje balantidiázu - ochorenie sprevádzané ulceróznym procesom hrubého čreva. Príčinný činiteľ sa nachádza v natívnom nátere vo forme vegetatívnej formy a cysty. Materiál na náter (výkaly a hlien) sa odoberie počas sigmoidoskopického vyšetrenia a vysieva sa na špeciálne médiá.

Diagnostika bičíkovcov (leishmánia, giardia, trypanozómy, trichomonády)

Leishmania, trypanosoma, giardia, trichomonády sú pre človeka nebezpečné.

Leishmania– mikróby, ktoré spôsobujú leishmaniózu, sa vyšetrujú v krvných náteroch, materiáloch kostná dreň, škrabance z kožných infiltrátov. V niektorých prípadoch sa pri diagnostike Leishmania používa výsev na živných pôdach.

trypanozómy– patogény spavá choroba(Americká/africká trypanozomiáza alebo Chagasova choroba).

Africká verzia je definovaná v počiatočné obdobie pri štúdiu periférnej krvi. Patologické mikróby počas progresie ochorenia sa nachádzajú v materiáli punkcií lymfatických uzlín, v pokročilých štádiách - v cerebrospinálnej tekutine.

Na diagnostiku trypanozómov v prípade podozrenia na Chagasovu chorobu sa testovaný materiál skúma pod mikroskopom pri malom zväčšení. V tomto prípade sú šmuhy a hustá kvapka vopred zafarbené.

Trichomonas(črevné, orálne,) sa zisťujú mikroskopiou materiálov odobratých z postihnutých slizníc.

Identifikácia sporozoanov (malarické plazmodium, pôvodca kokcidózy atď.)

Najbežnejším a najnebezpečnejším druhom pre ľudí je malarické plazmodium, ktoré má 4 hlavné odrody patogénu: pôvodcu trojdňovej malárie, štvordňovej malárie, tropická malária a ovál malárie.

Sexuálny vývoj Plasmodium (sporogónia) prebieha u komárov rodu Anopheles. Asexuálna (schizogónia tkanív a erytrocytov) - v tkanive pečene a ľudských erytrocytoch. Tieto vlastnosti životný cyklus sa musí brať do úvahy pri diagnostike malarického plazmódia.

Takže v krvi čerstvo chorého pacienta možno nájsť zárodočné bunky sporogónneho cyklu. Ale na vrchole malarických záchvatov sa schizonty objavujú vo veľkom počte v krvi.

Navyše v rôzne fázy Malárická horúčka sa prejavuje v rôznych formách Plasmodium:

• v období chladu je krv naplnená merozoitmi, akýmsi schizontom;
• vo výške teploty sa v erytrocytoch hromadia prstencové trofozoity;
• pokles teploty je charakterizovaný prevahou améboidných trofozoitov;
• počas obdobia normálneho stavu krv obsahuje dospelé formy schizontov.

Štúdium pôvodcu malárie (malarické plazmodium) sa uskutočňuje v nátere a v hustej kvapke.

Poznámka:diagnóza malárie pri štúdiu náterov a hustých krvných kvapiek je niekedy chybná. Krvné doštičky môžu byť v niektorých prípadoch chybne klasifikované ako malarický patogén. Tiež fragmenty leukocytov a iných buniek niekedy simulujú plazmodium.

Základné metódy výskumu prvokov

Poďme sa v krátkosti pozrieť na najčastejšie metódy výskumu prítomnosti prvokov.

Diagnostika prvokov pomocou natívneho náteru a náteru zafarbeného Lugolovým roztokom (vo výkaloch)

Liečivo sa pripravuje z emulzie výkalov v izotonickom roztoku. Na podložné sklíčko sa nanesú dve kvapky chloridu sodného a Lugolovho roztoku. V oboch kompozíciách drevená palica pridá sa testovaný materiál a po prikrytí sklom sa pozoruje pri rôznych rozlíšeniach mikroskopu.

Podľa určitých znakov sú nájdené prvoky registrované. Pre presnosť sú pripravené 2-3 prípravky z jedného materiálu. V pochybných prípadoch sa analýza opakuje niekoľkokrát počas 2-3 týždňov.

Metóda môže odhaliť vegetatívne a cystické formy:

• lamblia;
• balantidia;
• dyzentéria améba.

Spolu s patogénnymi formami sa určujú aj nepatogénne prvoky. Zdraví nosiči majú tiež luminálnu a cystickú formu.

Dôležité:výskum, aby sa predišlo nepresnostiam a chybám, by sa mal vykonávať opakovane.

Výsledok diagnostiky prvokov metódou natívneho a farbeného náteru by mal obsahovať popis formy patogénu (priesvitný, cysta, tkanivo).

Požiadavky na výskum:

• materiál odobratý na analýzu (tekuté výkaly) sa vyšetrí najneskôr 30 minút po defekácii;
• vytvorené výkaly musia byť diagnostikované do 2 hodín po defekácii;
• materiál by nemal obsahovať nečistoty ( dezinfekčné prostriedky, voda, moč);
• na prácu s materiálom sa používajú iba drevené palice, sklenené nie sú vhodné kvôli skĺznutiu hlienu;
• Tyčinky je potrebné ihneď po použití spáliť.

Konzervačná metóda (vyšetrenie trusu) pri diagnostike prvokov

Štúdia sa uskutočňuje fixáciou prvokov pomocou konzervačnej látky. Rozdiel medzi touto metódou a predchádzajúcou je v tom, že konzervačné látky vám umožňujú dlhodobo uchovávať liek.

Použité konzervačné látky:

• Barrow. Obsahuje konzervačné zložky: 0,7 ml chloridu sodného, ​​5 ml formalínu, 12,5 ml 96% alkoholu, 2 g fenolu a 100 ml destilovanej vody. Farbiace zloženie: 0,01% roztok tionínu (azúrový).
• Safarlievovo riešenie. Zloženie: 1,65 g síranu zinočnatého, 10 ml formalínu, 2,5 g kryštalického fenolu, 5 ml octová kyselina 0,2 g metylénovej modrej, 100 ml vody. Tento konzervačný prostriedok sa používa v prípadoch, keď sa materiál musí skladovať dlhšie ako mesiac.

Prázdne fľaše sa naplnia konzervačným prostriedkom, materiál sa do nich prenesie v pomere 3: 1, potom sa v prípade potreby pridá farbivo. Vyhodnotenie výsledkov sa uskutočňuje v štúdii 2-3 liekov.

Metóda obohatenia formalínom a éterom (analýza prítomnosti prvokov vo výkaloch)

Táto diagnostická metóda umožňuje oddeliť a koncentrovať cysty prvokov. Na analýzu sú potrebné tieto zložky: formalín (10 ml), 0,85 g izotonického roztoku, destilovaná voda, éter sírový, Lugolov roztok.

Zmes biomateriálu s uvedenými kvapalinami sa zmieša a odstredí. Zrazenina získaná na dne skúmavky sa zafarbí Lugolovým roztokom a skúma sa na prítomnosť cýst a vegetatívnych foriem.

Metóda detekcie Leishmania (náter z kostnej drene)

Na diagnostiku leishmaniózy sa používajú činidlá: zmes Nikiforov (éter síry a etylalkohol), fosfátový pufor, Azur-eozín podľa Romanovského.

Látka kostnej drene sa po špeciálnej príprave veľmi opatrne umiestni na podložné sklo. Používa sa mikroskop s imerzným systémom.

AT akútne obdobie choroby sa nachádzajú v bodkovaných veľké množstvo leishmania.

Poznámka:niekedy krvinky môžu pripomínať liečenú leishmániu, preto je veľmi dôležité, aby bol laboratórny technik pozorný a mal dostatok skúseností na samostatné štúdium.

Metóda detekcie leishmánie v nátere z kožného infiltrátu

Požadované činidlá sú podobné predchádzajúcemu testu.

Testovaný materiál sa získa z existujúceho tuberkulózneho alebo ulcerózneho obsahu. Škrabanie s podozrením na leishmaniózu sa robí veľmi opatrne skalpelom, bez krvi. Potom sa prípravok pripraví na sklo. Pre presnosť získaných výsledkov sa súčasne skúma niekoľko prípravkov.

V prítomnosti choroby, medzi makrofágmi, fibroblastmi a lymfoidnými bunkami prítomnými v testovanom materiáli, sa tiež stanoví Leishmania.

Spôsob izolácie čistej kultúry Leishmania získanej zoškrabaním patologických tkanív

Pomocou tejto metódy diagnostiky sa najjednoduchšie tkanivové škrabance umiestnia do špeciálneho živného média, v ktorom sa Leishmania aktívne rozmnožuje.

Pred zoškrabaním sa pokožka opatrne ošetrí alkoholom, potom sa na tuberkulóze urobí rez, z ktorého sa odstráni obsah a umiestni sa do skúmavky s médiom. Materiál sa odoberie niekoľkokrát, potom sa umiestni do rôznych skúmaviek. Potom v termostate pri teplote 22-24 stupňov prebieha kultivácia. Výsledky sa vyhodnocujú pod mikroskopom. Táto metóda sa používa vtedy, keď sú iné, lacnejšie a rýchlejšie metódy diagnostiky prvokov neúčinné.

Ako sa v praxi dešifrujú testy na prítomnosť prvokov kvapkou krvi, si môžete pozrieť vo videorecenzii:

Lotin Alexander, lekársky publicista

Kapitola III. Diagnostika helmintiáz a metódy helmintologického výskumu

Je potrebné vyšetriť na helmintiázy všetkých pacientov, o ktorých sa uchádza zdravotná starostlivosť, a najmä pacienti, ktorí sa obracajú na pediatra, terapeuta a neurológa so sťažnosťami na javy z gastrointestinálny trakt, nervový systém a s anémiou. Ak lekár nemôže vždy aplikovať laboratórne metódy výskumu, potom je každý povinný pohovoriť s pacientom o uvoľnení helmintov od neho. zdravotnícky pracovník poskytovanie starostlivosti v ambulantnom alebo nemocničnom prostredí.

Za prítomnosti tých, ktoré sú uvedené v príslušných kapitolách klinické indikácie diagnóza by sa mala objasniť pomocou laboratórnych testov na helmintiázu.

Vzhľadom na prevahu črevné helmintiázyštúdium výkalov má najväčší praktický význam.

Metódy na štúdium výkalov pre helmintiázy

Výkaly sa dodávajú do laboratória v čistom skle (asi štvrtina šálky výkalov odobratých z rôznych miest v jednej porcii); pri bežnom vyšetrení je povolené dodávanie výkalov do laboratória v zápalkových škatuľkách alebo obľúbených výtlačkoch.

Na kontrolu odčervovania sa podáva celá časť výkalov zozbieraných po užití antihelmintika a preháňadla (podľa predpisu lekára) (vo veľkých uzavretých sklenené nádoby, vedrá).

Mikroskopické vyšetrenie výkalov je hlavným pri diagnostike črevných helmintiáz; vždy by mu malo predchádzať celkové makroskopické vyšetrenie trusu na zistenie segmentov veľkých pásomníc, škrkaviek, škrkaviek atď.

Stolica by mala byť čerstvá alebo konzervovaná (v 5% roztoku formalínu), pretože sušenie dramaticky mení štruktúru vajec. Navyše, keď stoja výkaly, vajíčka niektorých helmintov (napríklad hákovcov) sa rýchlo vyvíjajú, čo sťažuje diagnostiku.

Podľa pokynov Ministerstva zdravotníctva ZSSR je potrebné súčasne vyšetrovať výkaly pomocou Füllebornovej metódy a natívneho náteru.

natívny náter

Natívny náter: malý kúsok trusu (veľkosť hrášku) odobratý zápalkou, sklenenou alebo drevenou tyčinkou z rôznych miest podávanej porcie sa opatrne rozotrie na podložnom sklíčku v kvapke 50% roztoku glycerolu resp. vo fyziologickom roztoku alebo vo vode. Prikryte krycím sklíčkom, ktoré mierne zatlačte (preparovacou ihlou). Náter by mal byť tenký, priehľadný a jednotný. Používa sa len ako doplnok k iným metódam, ktoré obohacujú liek. Mali by ste vidieť aspoň dva prípravky.

Na detekciu lariev helmintov (ako aj ich vajíčok) sa natívny náter urobí nasledovne (podľa Shulmana): 2-3 g výkalov sa dôkladne premiešajú „skrútením“ sklenená tyč do emulzie s päťnásobným množstvom čistej vody resp fyziologický roztok. Počas miešania sa larvy hromadia na sklenenej tyčinke, preto sa ihneď po ukončení miešania kvapka emulzie rýchlo prenesie sklenenou tyčinkou na podložné sklíčko, prikryje sa krycím sklíčkom a skúma sa. S. D. Lyubchenko (1936) dokázal, že metóda krútenia je účinnejšia ako metóda náteru, najmä pokiaľ ide o vajíčka ascaris. Na základe práce S. D. Lyubčenka považujeme za vhodné nahradiť metódu rozmazania metódou twist.

Füllebornova metóda

Füllebornova metóda: 5-10 g výkalov odobratých z rôznych miest sa umiestni do nádoby s objemom 50-100 ml a opatrne sa rozotrie sklenenou alebo drevenou tyčinkou v nasýtenom roztoku stolová soľ(400 g tejto soli sa rozpustí v 1 litri vody, zahreje sa do varu a prefiltruje sa cez vrstvu vaty alebo gázy; roztok sa používa za studena: merná hmotnosť 1,2). Roztok sa prilieva postupne, kým sa nedosiahne homogénna suspenzia a celkové množstvo naliateho roztoku by malo byť približne 20-násobné. väčšie množstvo výkaly. Fülleborn odporučil použitie čajových pohárov na miešanie fekálií, ale vhodnejšie je pripraviť suspenziu v 50-100 ml nádobách od masti, pričom na každý rozbor použite dve nádoby (alebo v 100 ml pohároch).

Ihneď po príprave suspenzie sa z povrchu odstráni špachtľou, kovovou naberačkou alebo kúskom čistého papiera, veľké častice, ktoré vyplávali na povrch (rastlinné útvary, nestrávené zvyšky potravy a pod.), potom zmes sa nechá stáť 1-1,5 hodiny. Po uplynutí tejto doby sa celý film odstráni z povrchu zmesi dotykom drôtenej alebo platinovej slučky (plochej) s priemerom nie väčším ako 1 cm, ohnutej v pravom uhle; Film sa pretrepe na podložnom sklíčku a prikryje sa krycím sklíčkom. Pod každé krycie sklíčko (18x18 mm) nakvapkajte 3-4 kvapky. Celkovo by sa mali pripraviť aspoň 4 prípravky (pre každý prípravok jedno krycie sklíčko). Slučka sa kalcinuje na ohni a po každej analýze sa premyje vodou.

Podľa Füllebornovej metódy sa vajíčka všetkých háďatiek (s výnimkou vajíčok neoplodnených škrkaviek) a vajíčka trpasličích pásomníc rýchlo a jednoducho zistia.

Metóda Berman sa používa na štúdium výkalov pre larvy helmintov (so strongyloidózou). Táto metóda je nasledovná: 5 g fekálií na kovovej mriežke (na tento účel je vhodné sitko na mlieko) sa umiestni na sklenený lievik pripevnený na statíve. Na spodný koniec lievika sa nasadí gumená hadička so svorkou.

Sieťka s výkalmi sa zdvihne a do lievika sa naleje voda zohriata na približne 50° tak, aby Spodná časť siete s výkalmi boli ponorené do vody. Larvy sa aktívne pohybujú do vody a hromadia sa v spodnej časti gumenej trubice. Po 2-4 hodinách sa svorka otvorí a kvapalina sa spustí do jednej alebo dvoch centrifugačných skúmaviek.

Po odstredení počas 1-2 minút vyššia časť tekutiny sa rýchlo scedia a sediment sa po kvapkách nanesie na podložné sklíčka a vyšetrí sa pod krycími sklíčkami alebo sa rozloží v tenkej vrstve na 2-3 veľké podložné sklíčka a potom sa vyšetrí bez krycích sklíčok.

Bermanova metóda sa používa aj na vyšetrenie pôdy na prítomnosť lariev machovky.

Stollova metóda

Na určenie intenzity invázie sa používa metóda Stoll. Do špeciálnej sklenenej banky sa naleje desaťnormálny roztok hydroxidu sodného po značku 56 cm3 a potom sa pridávajú výkaly, kým hladina kvapaliny nedosiahne 60 cm3, t.j. 4 cm3. Po pretrepaní sklenenými guľôčkami sa odoberie 0,075 ml zmesi na vyšetrenie a vyšetrí sa pod jedným alebo dvoma obyčajnými krycími sklíčkami. Výsledné množstvo sa vynásobí 200, čím sa získa počet vajíčok obsiahnutých v 1 cm 3 výkalov.

Štúdium obsahu dvanástnika

Dvanástniková šťava a cystická žlč, získané obvyklým spôsobom sondovaním (a cystickou žlčou a po reflexe zo žlčníka), sa dôkladne zmiešajú s rovnakým objemom etyléteru; zmes sa odstredí a potom sa zrazenina skúma pod mikroskopom. Okrem sedimentu sa mikroskopickému vyšetreniu musia podrobiť aj vločky plávajúce v kvapaline, ktoré môžu obsahovať vajíčka helmintov. Pri skúmaní vajíčok helmintov žalúdočnej šťavy a zvratkov môžete použiť rovnakú techniku.

Ak máte podozrenie, treba vykonať vyšetrenie duodenálnej šťavy a obsahu žalúdka helmintické ochorenia pečeň, žlčník (opistorchiáza, fasciolóza, dikrocelióza) a dvanástnik(strongyloidóza).

Vyšetrenie spúta

Spútum sa rozotrie na sklenenú dosku, pevne sa prikryje ďalšou sklenenou doskou a skúma sa voľným okom na svetlom a čiernom pozadí, ako aj pod lupou v prechádzajúcom svetle. Oddelené kúsky spúta („hrdzavé“ nahromadenia, zvyšky tkaniva atď.) sa nanesú v tenkej vrstve na podložné sklíčko, pevne sa prikryjú krycím sklíčkom a skúmajú sa pod mikroskopom s malým a veľkým zväčšením.

a) Na diagnostiku cysticerkózy kože, podkožia alebo svalov sa najprv voľným okom vyšetrí asepticky odrezaný kúsok príslušného tkaniva. Tkanivové rezy sa oddelia pomocou pitevných ihiel, aby boli viditeľné jednoduchým okom vezikula - cysticercus (foto A); jeho dĺžka je 6-20 mm, šírka je 5-10 mm. Keď sa nájde bublina, ktorá je podozrivá z cysticerku, rozdrví sa medzi dve podložné sklíčka a vyšetrí sa pod mikroskopom. Cysticercus (Cistycercus cellulosae) je určený prítomnosťou skolexu so štyrmi prísavkami a halo háčikov (foto B).

Fotka. A - cysticerci so scolexami otočenými von; B - Hlava pásomnice bravčovej.

b) Na diagnostiku trichinelózy sa asepticky odrezaný kúsok svalu (biceps alebo gastrocnemius) opatrne rozdrví v 50% roztoku glycerolu na najtenšie vlákna pomocou pitevných ihiel. Rozdrvené svaly sa stlačia medzi dve podložné sklíčka a skúmajú sa pri malom zväčšení mikroskopu v stmavenom zornom poli. Vyšetrenie svalov na trichinelózu sa odporúča vykonať najskôr v 8. deň choroby. Larvy trichinel sú vo svaloch v stočenej polohe: sú uzavreté v tobolkách citrónového tvaru.

Fotka. A - larvy Trichinella vo svaloch; B - Kalcifikované kapsuly Trichinella.

Fluoroskopia

Najčastejšie sa fluoroskopia používa na diagnostiku echinokokózy a menej často cysticerkózy. Cysticerci sa na fluoroskopii zistia až po kalcifikácii (v prípadoch dlhotrvajúceho ochorenia). Za posledné roky fluoroskopia sa tiež používa na diagnostiku askariózy v ranom štádiu lariev a čiastočne v črevnom štádiu.

Počas obdobia migrácie lariev ascaris (a ankylostomity) v pľúcach sa zisťujú nestabilné, niekedy viacnásobné zápalové ložiská; súčasne sa v krvi objavuje výrazná eozinofília.

Sexuálne zrelé škrkavky sú jasne viditeľné na fluoroskopii čriev postihnutých jedincov. Táto metóda, napriek svojej zložitosti a ťažkopádnosti, by sa mala používať ako doplnková metóda na diagnostikovanie askariózy v prípadoch s negatívnym skatologickým rozborom. Podľa E. S. Geselevicha zo 180 pacientov s ascaridózou identifikovaných fluoroskopiou sa 54 vajíčok ascaris nenašlo vo výkaloch (pozri).

Pomocou sanitárnych a helmintologických štúdií sa v prostredí nachádzajú vajíčka a larvy helmintov, určuje sa ich druh, kvantitatívne zloženie a ich životaschopnosť.

Testovanie pôdy na vajíčka helmintov. Vzorky pôdy s hmotnosťou 100-300 g sa odoberajú v hĺbke 10-60 cm v blízkosti žúmp, odpadkových košov, ihrísk a pod. Plnia sa 0,85 % vodný roztok chloridu sodného alebo 3 % tekutiny Barbagallo a uchovávajte až do vyšetrenia v chladničke pre domácnosť. Skladovateľnosť vzoriek nie je dlhšia ako 1 mesiac. Pôda sa skúma podľa Romanenkovej metódy (1968, 1982): 25 g pôdy sa vloží do centrifugačných skúmaviek s objemom 250 ml, pridá sa 3% roztok sodnej alebo draselnej zásady v pomere 1:1. Výsledná zmes sa dôkladne premieša, nechá sa stáť 20 až 30 minút a potom sa 5 minút odstreďuje pri 800 otáčkach za minútu. Supernatant sa odstráni a zrazenina sa premyje 1-5 krát, kým sa nezíska číry supernatant. Potom sa k sedimentu pridá 150 ml nasýteného roztoku dusičnanu sodného (relatívna hustota - 1,38-1,40), dôkladne sa premieša a odstredí, potom sa rovnaký roztok pridá do každej skúmavky na úroveň 2-3 mm pod ich hrany. Skúmavky sa prikryjú podložným sklom tak, aby bola medzera široká najviac 10 mm, cez ktorú sa pomocou pipety pridáva roztok dusičnanu sodného, ​​až kým sa nedostane do kontaktu so spodným povrchom podložného sklíčka. Potom skúmavku dôkladne uzavrite podložným sklíčkom a po 20-25 minútach odstátia sa sklo vyberie a prevráti dnom nahor. Na miesto odstráneného skla sa vloží druhý a v prípade potreby aj tretí. Na odobraté sklíčka sa nanesie kvapka 50% roztoku glycerolu, prekryje sa krycím sklíčkom a pod svetelným mikroskopom sa mikroskopuje. Povrchový film je možné skúmať priamo v centrifugačnej skúmavke pod binokulárnym mikroskopom MBS (N. L. Chekina, 1977).

Pre larvy helmintov sa pôda skúma podľa Bermanovej metódy.
Testovacia voda na vajíčka helmintov. Vzorka vody sa odoberá z * nádrží v množstve 0,5 až 10 litrov, čo závisí od stupňa jej znečistenia, a zo studní - od 20 do 25 litrov. Odporúča sa odoberať vodu rýchlosťou 0,5 - 1 l každých 3-5 minút. Vajíčka obsiahnuté vo vode sa koncentrujú sedimentáciou alebo filtráciou pomocou membránových, papierových alebo látkových filtrov. Rozbor vody sa vykonáva podľa Vasilkovej metódy.

Vyšetrenie odpadových vôd na vajíčka helmintov. Vzorky odpadových vôd v podmienkach malých čistiarní sa odoberajú v týchto stupňoch ich čistenia: pred vstupom do čistiarní ("surová" voda), v usadzovacej časti zariadenia, kontaktnej nádrži, keď vteká do bioirudu alebo otvorený zásobník. V centralizovaných čistiarňach sa voda odoberá pred vstupom do čistiarne, po mechanickom čistení, po sekundárnych usadzovacích nádržiach, biologických nádržiach, filtračných poliach, poľnohospodárskych závlahových poliach. "Surová" voda sa skúma v množstve 2 až 5 litrov a v procese umelého biologického čistenia a po jeho ukončení - od 10 do 15 litrov. Vzorky sa odoberajú každú hodinu počas dňa (denný priemer) alebo od 7 do 20 hodín (denný priemer). Odpadovú vodu skúmajte podľa Romanenkovej metódy. Odpadová voda sa naleje do skleneného valca s objemom 1-2 litre, pridá sa jeden z koagulantov (síran hliníka, železa alebo medi) v dávke 0,3-0,5 g/l a dôkladne sa premieša. Po 40 až 50 minútach sa vyčírený supernatant odstráni sifónom a zrazenina sa prenesie do centrifugačných skúmaviek a odstreďuje sa 3 minúty pri 1000 ot./min. Potom sa kvapalná časť scedí a k sedimentu sa pridajú 2-4 ml 1-3% roztoku kyseliny chlorovodíkovej na rozpustenie koagulačných vločiek. Výsledná zmes sa odstredí, kvapalná časť sa odstráni a sediment sa ďalej skúma podľa Romanenkovej metódy použitej na analýzu pôdy.
IK Padchenko so spoluautormi (1982) vyvinuli nasledujúce metódy na štúdium pôdy, vody a odpadových vôd pre vajíčka helmintov.

Testovanie pôdy na vajíčka helmintov. Vybraná vzorka pôdy (nie menej ako 300 g) sa nanesie do veľkej fajansovej mažiare, postupne sa k nej pridá 3% roztok sodnej alebo draselnej bázy a opatrne sa rozdrví paličkou, kým sa nevytvorí homogénna hmota. Výsledná zmes sa naleje do skleneného valca s objemom 10 litrov, ktorý sa predtým naplní do 3/4 objemu vodou z vodovodu a nechá sa stáť 5 minút. Husté nečistoty plávajúce na povrchu zmesi sa odstránia pomocou sieťovej slučky. Po 5 minútach usadzovania sa supernatant naleje do ďalšieho veľkého valca so sifónom a výsledná zrazenina sa prenesie do 1-litrového valca a opäť sa premyje vodou z vodovodu (aspoň 2-3 krát). Kvapalina nad usadeninou vytvorená v tomto prípade v malom valci sa zakaždým preleje sifónom po 5 minútach usadzovania do veľkého valca, kde sa zmieša s kvapalnou časťou zmesi získanej po prvých 5 minútach usadzovania. Do kvapaliny zhromaždenej vo veľkom valci sa pridá jeden z koagulantov (síran hlinitý, síran železnatý atď.) v množstve 0,3 g na 1 liter kvapaliny a nechá sa stáť 1 až 1,5 hodiny, kým sa úplne neskončí. jasný. Výsledný supernatant sa odstráni sifónom a k sedimentu sa pridá 1-3% roztok kyseliny chlorovodíkovej, aby sa rozpustili koagulačné vločky. Výsledná zmes sa nechá stáť 18 až 24 hodín, potom sa tekutá časť odstráni sifónom a sediment sa vyšetrí na vajíčka helmintov. Na tento účel sa zrazenina dôkladne pretrepe a 1 kvapka výslednej suspenzie sa nanesie na podložné sklíčko Pasteurovou pipetou, prikryje sa krycím sklíčkom a podrobí sa mikroskopii. Preskúmajte aspoň 1 ml sedimentu a potom matematicky prepočítajte celý jeho objem. V prípade nevýznamnej kontaminácie vzoriek pôdy sa celý sediment podrobuje mikroskopickému skúmaniu.

Vyšetrenie odpadových vôd na vajíčka helmintov. Odobraté vzorky odpadových vôd z rôzne štádiá jeho čistenie na čistiarni, nalial do 10-litrových fliaš a bránil 5 minút. Husté nečistoty, ktoré vyplávali na povrch kvapaliny, sa odstránia slučkou. Po 5 minútach usadzovania sa supernatant preleje sifónom do ďalšieho veľkého valca a zrazenina sa odstráni. Výsledná kvapalná časť odpadovej vody sa zmieša vo veľkom valci s koagulantom a ďalej skúma rovnakým spôsobom ako pôda (v štádiu pridávania koagulantu).
Vzorky vody z vodovodnej siete a rôznych nádrží sa zmiešajú vo veľkom valci s koagulantom a ďalej sa skúmajú rovnakou metódou ako odpadová voda.

Štúdia splaškových kalov pre vajíčka helmintov. Vzorky čistiarenského kalu sa odoberajú z 5-10 miest po 100 ml, vkladajú sa do sklenených nádob s objemom 1-2 litre. Suché zrážky sa odoberajú rovnakou metódou ako pôda. Pridajte 100-150 ml sedimentu do 250 ml centrifugačnej skúmavky, centrifugujte 5 minút pri 1000 ot./min. Potom sa kvapalná časť vypustí a pridá sa k sedimentu čistá voda na predchádzajúci objem, dôkladne premiešajte a odstredte. Toto premývanie sedimentu sa opakuje 2-3 krát, potom sa k nemu pridá 3-5 g čistého piesku a výsledná zmes sa skúma rovnakým spôsobom ako pôda.
Podľa našich údajov sa čistiarenský kal skúma na vajíčka helmintov podľa nasledujúcej metódy: 1-litrová vzorka sedimentu sa opatrne rozdrví paličkou vo veľkej fajansovej trecej miske a postupne sa k nej pridá 3% roztok sodnej alebo draselnej bázy , a potom skúmaná pomocou rovnakej metódy, ktorou je pôda.

Vyšetrenie tampónov na vajíčka helmintov. Predmety vonkajšieho prostredia, ktoré sa majú študovať, sú zmyté vatové tampóny zvlhčený 1% roztokom sodnej zásady alebo 20% roztokom glycerolu. Tampóny sa premyjú do centrifugačných skúmaviek 2 až 3 % roztokom hydrogénuhličitanu sodného alebo 1 % roztokom zásady sodnej a odstredia sa. Výsledná zrazenina sa mikroskopicky skúma.

Stanovenie životaschopnosti vajíčok a lariev helmintov. Životaschopnosť vajíčok a lariev helmintov vzhľad stanovené pomocou životne dôležitých farbív, kultivačných metód a biologických testov na laboratórnych zvieratách.
Pod svetelným mikroskopom sa v mŕtvych alebo degenerujúcich vajíčkach helmintov škrupiny roztrhajú alebo deformujú, cytoplazma je uvoľnená, zakalená. Pri zahrievaní zrelých vajíčok ascaris, whipworms, pinworms na teplotu +37 ° C, larvy týchto helmintov vykazujú aktívnu pohyblivosť.

Pestovanie vajíčok a lariev helmintov. Nezrelé vajíčka oblých červov sa kultivujú pri teplote +24 ... +30 ° C v Petriho miskách (vlhká komora) v 3% roztoku formalínu pripravenom v 0,85% roztoku chloridu sodného a vajíčka bičíkovcov - v 3% roztoku kyselina chlorovodíková pri teplote +30 ... +35 ° C, vajíčka červov - v 0,85% roztoku chloridu sodného pri teplote Ch-37 ° C. Petriho misky sa otvárajú 1-2x týždenne kvôli prevzdušneniu a navlhčí sa v nich filtračný papier. čistá voda. Vývoj vajíčok je kontrolovaný 2-krát týždenne prítomnosťou známok delenia protoplastu na samostatné blastoméry. V prvých dňoch sa vo vajíčku vyvinie až 16 blastomér, ktoré prechádzajú do štádia morula (druhé štádium). Ak sa v yantoch do 2-3 mesiacov nevyskytnú žiadne známky vývoja, mali by sa považovať za mŕtve.

Pri tejto metóde sa zoberú čerstvé porcie výkalov zvierat, vložia sa do nádoby, naplnia sa vodou v pomere 1:5 a 1:10 a dôkladne sa premiešajú. Suspenzia sa nechá 5 minút. na zrážky. Potom sa horná vrstva vypustí do sedimentu, potom sa opäť naplní vodou a tieto operácie sa opakujú, kým kvapalina nad sedimentom nie je priehľadná. Potom, čo sa supernatant naposledy vypustí a sediment sa umiestni do kyvety alebo Petriho misky na vyšetrenie pod lupou. Keďže niektoré hlísty sú jasne viditeľné na bielom pozadí, zatiaľ čo iné sú na čiernom, pre úplnejší výber helmintov je Petriho miska umiestnená buď na bielom alebo čiernom papieri. Helminty sa vyberú pitevnou ihlou alebo kefkou a potom sa mikroskopujú, aby sa určil druh, pričom sa použije manuál, ako aj statívová lupa alebo stereoskopický mikroskop.

2.2. Skríningová metóda

Táto metóda využíva sadu 2-4 kovových sít s otvormi zmenšujúceho sa priemeru. Výkaly sa premývajú prúdom vody, pričom častice výkalov sú unášané vodou a hlísty sa v závislosti od hodnoty 6v zachytávajú na rôznych sitách. Potom sa vyberú a preskúmajú helminty. Táto metóda môže zbierať helminty rôznych veľkostí.

3. Metódy helmintoovoskopie

Helmintoovoskopiya (z latinského ovum - vajíčko, grécky skopeo - pohľad) spája skupinu výskumných metód, ktoré identifikujú vajíčka patogénov helmintiáz.

Bolo navrhnutých mnoho metód ovoskopie. Nie všetky si však zaslúžia praktickú pozornosť: niektoré sú náročné z hľadiska techniky vykonávania, zatiaľ čo iné vyžadujú značný čas na štúdium a iné sú neúčinné. V tomto príspevku uvádzame len tie metódy, ktoré si zaslúžia praktickú pozornosť.

Špecifická hmotnosť vajíčok je ťažšia ako obyčajná voda, v dôsledku čoho sa vajíčka helmintov ako ťažšie častice vymývajú z výkalov vodou a usadzujú sa na dne nádoby rôznou rýchlosťou v závislosti od špecifickej hmotnosti. Väčšie vajíčka sa usadia rýchlejšie.

V roztokoch solí s vysokou mernou hmotnosťou naopak vajíčka helmintov plávajú (flotačný jav) do hornej vrstvy a sústreďujú sa v nej.

Technológia všetkých moderné metódy helmintoskopia, ktoré sú rozdelené do troch skupín:

a) Metódy sedimentácie (sedimentácie) vajíčok helmintov;

b) Metódy flotácie vajíčok helmintov;

c) Kombinované metódy (sedimentácia a flotácia) vajíčok helmintov.

3.1. Spôsoby sedimentácie (sedimentácia)

Sú založené na princípe sedimentácie vajíčok helmintov suspendovaných v kvapaline, premývaní sedimentu a jeho skúmaní. Tieto metódy sa používajú najmä na diagnostiku tých helmintiáz, ktorých patogény vylučujú vajíčka s vysokou špecifickou hmotnosťou (fasciolóza, dikroceliáza, paramfistomatóza, opisthorchiáza a pod.). Techniky usadzovania sú menej účinné a náročnejšie na prácu ako flotácia. Je to spôsobené ťažkosťami pri hľadaní vajíčok helmintov v suspendovanom sedimente.

3.1.1 Metóda postupného splachovania

Vzorka výkalov s hmotnosťou 3-5 g sa umiestni do pohára, naleje sa malé množstvo vody a mieša sa tyčinkou alebo pinzetou, kým sa nezíska tekutá kašovitá hmota, potom sa po častiach pridáva voda do objemu 50 ml za stáleho miešania; Potom sa suspenzia prefiltruje cez kovové sito alebo gázu do iného pohára, v ňom sa usadí na 5-10 minút. Potom sa horná vrstva kvapaliny nad sedimentom vypustí a do sedimentu sa pridá nová časť vody a opäť sa nechá stáť 5 až 10 minút. Opísaný postup sa opakuje, kým sa voda nevyčistí. Naposledy sa scedí a zrazenina (asi 5 ml) sa naleje na podložné sklíčka alebo väčšie podložné sklíčka (12x19) a mikroskopické sklíčka.

Táto technika je široko používaná vo veterinárnych laboratóriách na diagnostiku fascioliázy, dikroceliázy, paramfistomatózy, eurygrematózy a iných helmintiáz u prežúvavcov. Zároveň je pracná a z hľadiska diagnostickej účinnosti je výrazne horšia ako špeciálne flotačné a kombinované metódy helmintoovoskopie.

Metódy intravitálnej laboratórnej diagnostiky helmintiáz:

— helmintokoprologické štúdie;

– helminthoovoskopické štúdie;

- helmintolarvoskopické štúdie;

— imunobiologická diagnostika;

– diagnostické odčervovanie a iné metódy;

Metódy diagnostiky post mortem:

— patoanatomické štúdie;

- úplné a neúplné helmintologické pitvy orgánov a tkanív (PHV a NPVT).

Skôr ako prejdem k uvedenej problematike tejto témy, považujem za vhodné definovať pojmy „invázia“ a „invazívne ochorenia“.

Invazívne ochorenia sa môžu vyskytovať v klinicky výraznej forme s významnou mortalitou, ako aj v latentnej (latentnej) forme.

V diagnostike invazívnych ochorení majú rozhodujúci význam laboratórny výskum, v dôsledku čoho je patogén založený.

Uvažujme o metódach intravitálnej diagnostiky helmintiáz. Na tento účel sa používajú makro- a mikroskopické štúdie, predovšetkým výkalov, moču, krvi, dermis, obsahu telesných dutín atď. Tieto metódy sú helmintické diagnostické štúdie, zameraná na nájdenie a štúdium samotných helmintov, ich fragmenty vajíčok a lariev Eliáša sú najviac založené na dôkazoch a široko používané na diagnostiku hlístových infekcií.

Materiál pre diagnostické štúdie by mal byť zbavený akýchkoľvek nečistôt a kontaminantov, odporúča sa odoberať výkaly z konečníka zvieraťa, mali by byť čerstvé, mali by byť uchovávané v chlade (nie > 5 ° C), môžu tiež konzervovať 5-10% roztokom formalínu alebo kyselinou karbolovou.

Helmintoskopia- používa sa na detekciu celých vzoriek helmintov alebo ich fragmentov vo výkaloch, najmä pri vyšetrovaní črevnej cestodózy. Táto metóda sa používa aj na kontrolu účinnosti vykonávaného odčervenia, aby sa zohľadnil počet vypudených helmintov. Pre tieto štúdie je potrebné odobrať celú jednorazovú časť výkalov a aby sa zohľadnila účinnosť odčervenia, mali by sa zhromaždiť všetky exkrementy pridelené zvieratám do 2-4 dní po ošetrení. Zozbierané výkaly sa predbežne skúmajú voľným okom. Potom sa umiestnia do kovovej nádoby, zriedia sa 5- až 10-násobným množstvom vody, premiešajú sa a nechajú sa nejaký čas usadiť, potom sa vrchná vrstva scedí (až sedimentuje) a opäť sa pridá voda. Tieto manipulácie postupného prania a usadzovania sa vykonávajú niekoľkokrát. Výsledná zrazenina sa skúma po malých častiach v kyvetách (Petriho misky) na bielom a čiernom pozadí. Všetky viditeľné hlísty sa vyberú ihlou a skúmajú sa pod mikroskopom, čím sa stanoví vzhľad.

Helmintoovoskopiya je metóda diagnostiky helmintiáz v dôsledku detekcie vajíčok helmintov v materiáli. Na takéto štúdie sa používajú tieto zariadenia a nástroje: biologický mikroskop, sklenené podložné sklíčka, Petriho misky, sklenené alebo plastové kadičky (nie > 4-5 cm v priemere), kadičky s objemom 50 ml, filtračné sitá (s nylonovou sieťkou , pančuchový tovar), sklenené tyčinky , kovové očká s priemerom krúžku 8-10 mm.

Na diagnostické štúdie sa používajú flotačné roztoky. Najlepšiu flotačnú schopnosť majú roztoky pri teplote 20-22 o C. Hustotu roztoku udávame hustomerom. Nasýtený roztok technického ledku alebo dusičnanu amónneho s hustotou 1,32 (1500 g na 1 liter vriacej vody); dusičnan sodný alebo dusičnan sodný s hustotou 1,38 (pomer soli a horúcej vody je 1: 1); síran horečnatý (síran horečnatý) s hustotou 1,26-1,28 (920 g na 1 liter horúcej vody); tiosíran sodný alebo hyposulfit sodný, hustota 1,38-1,40 (1750 g na 1 liter vriacej vody); síran zinočnatý s hustotou 1,24 (400 g na 1 liter vody); kuchynská soľ, s hustotou 1,2 (400 g soli v 1 litri vody sa zahreje do varu), sa používa v studenom stave.

Najjednoduchšou metódou helmintoovoskopického vyšetrenia výkalov je metóda natívneho náteru. Malý kúsok výkalov sa umiestni na podložné sklíčko, pridajú sa 2-3 kvapky zmesi rovnakých dielov glycerolu a vody, dôkladne sa premieša, prikryje sa krycím sklíčkom a pozoruje sa pod mikroskopom. Táto metóda je nespoľahlivá, pretože pri slabej invázii dáva negatívny výsledok.

Metóda postupného splachovania(metóda sedimentácie, sedimentácia) sa používa na diagnostiku trematodózy zvierat, ktorých vajíčka patogénov majú veľkú špecifickú hmotnosť a nezachytávajú sa metódou floatingu (flotácie). Vezmite 5 g fekálií, zmiešajte s 10-násobným množstvom vody, prefiltrujte cez sitko alebo gázu a filtrát nechajte 5 minút odstáť. Potom sa kvapalina vypustí a k sedimentu sa pridá čistá voda a opäť sa nechá stáť 5 minút. Kým sa kvapalina nevyjasní. Kvapalina sa vypustí a sediment sa skúma pod mikroskopom na prítomnosť motolic.

Na diagnostiku háďatiek a cestodózy sa najčastejšie používajú flotačné metódy. Najbežnejšou a najčastejšie používanou metódou je Füllebornova metóda. Na tento účel vezmite 10 - 20 g výkalov, vložte ich do nádoby alebo pohára s objemom 100 - 200 ml, opatrne potrite pohárom alebo drevenou tyčinkou v nasýtenom roztoku kuchynskej soli. Celkové množstvo pridaného roztoku by malo byť približne 20-násobkom množstva výkalov. Potom prefiltrujte a nechajte 30 minút. Kovovou slučkou stiahneme film z povrchu usadenej tekutiny a prenesieme na podložné sklíčko, prikryjeme krycím sklom a skúmame pod mikroskopom. Metóda Shcherbovich sa používa na detekciu vajec s vyššou hustotou (napríklad metastrongylidové vajcia), na ktoré sa používa nasýtený roztok. síran horečnatý. Vzorka stolice (3-5 g) sa mieša vo vode, kým sa nezíska homogénna suspenzia. Prefiltrujte cez sitko do centrifugačnej skúmavky a centrifugujte 1-2 minúty. Vrchná vrstva sa vysuší a k sedimentu sa pridá nasýtený roztok síranu horečnatého, dobre sa premieša a znova sa odstreďuje 1 až 2 minúty. Potom sa pomocou kovovej slučky odstráni horný film, umiestni sa na podložné sklíčko, prikryje sa krycím sklíčkom a skúma sa pod mikroskopom.

Metóda Kotelnikova a Khrenova. Vzorka výkalov (3 g) sa vloží do pohára a naleje sa malé množstvo nasýtený roztok dusičnanu amónneho, premiešajte sklenenou (drevenou) tyčinkou a pridajte roztok do 50 ml. Suspenzia sa prefiltruje do iného pohára a nechá sa 10-15 minút. Slučkou odoberieme z povrchu 3-4 kvapky, prenesieme na podložné sklíčko a mikroskopicky pri malom zväčšení mikroskopu. Nájdeme vajíčka ascaris, trichocephalus, esofagostomy, strongyloidy, metastrongylidy, neoaskaridy, strongyláty tráviacich orgánov, moniesius a tisaniezium, paraskaridy, toxocaris atď.

Metóda N.V. Demidov na diagnostiku fascioliázy. Vzorka výkalov (3 g od oviec, 5 g od veľ dobytka), vložte do pohára, nalejte nasýtený roztok chloridu sodného, ​​dôkladne premiešajte sklenenou tyčinkou a nechajte stáť 15-20 minút. Veľké častice sú odstránené z povrchu; kvapalinu odsajeme injekčnou striekačkou, alebo opatrne scedíme, necháme asi 20-30 ml, k sedimentu pridáme vodu do celého objemu pohára, dôkladne premiešame, prefiltrujeme cez sito alebo 1 vrstvu gázy; kvapalina sa opäť odsaje, pričom zostane 15-20 ml sedimentu; sediment sa naleje do malých kónických pohárov, odstaví sa na 3-5 minút, kvapalina sa odsaje a sediment sa prenesie na podložné sklíčko, pričom sa skúma pod mikroskopom s malým zväčšením.

Miláčik metóda kombinuje postupy usadzovania a flotácie. Feces sa zmiešajú s vodou a odstredia sa 3-5 minút. Supernatant sa scedí a k sedimentu sa pridá Darlingova kvapalina (glycerol s nasýteným roztokom chloridu sodného, ​​1:1), dôkladne sa premieša a znova sa odstreďuje 3 až 5 minút. Pomocou kovovej slučky odstráňte film na podložnom sklíčku, prikryte krycím sklíčkom a preskúmajte.

Existuje oveľa viac modifikovaných výskumných metód na detekciu vajíčok helmintov. Existujú štandardizované metódy Fülleborna, Shcherbovicha atď. Pre všetky štúdie sa odoberajú rovnaké misky, vzorky sa usadzujú a súčasne odstreďujú, používajú sa slučky rovnakého priemeru a porovnáva sa počet vajec v poli pohľadom mikroskopu alebo v jednej kvapke povrchového filmu pred a po spracovaní zvierat posúďte účinnosť vykonaného odčervenia. Najjednoduchšia a najpresnejšia je metóda navrhnutá M.Sh.Akbaevom pomocou mriežky vyrobenej z fotografického filmu po r. röntgenových lúčov. Okrem toho sa používajú kvantitatívne helminthoovoskopické štúdie.

Tabuľková metóda. Najprv sa 56 ml vody naleje do 100 ml kužeľa a označí sa zvonka na úrovni jeho menisku. Potom sa nalejú ďalšie 4 ml vody a urobí sa nová značka. Voda sa vyleje a do odmernej banky sa naleje 56 ml 0,1 N roztoku hydroxidu sodného, ​​pridá sa toľko fekálií, aby hladina kvapaliny dosiahla 60 ml. (4 cm 3 výkaly), nalejte 10-15 guľôčok, dôkladne pretrepte. Ihneď po pretrepaní odmernou pipetou sa odoberie 0,075 ml alebo 0,1 ml zmesi, nanesie sa na podložné sklíčko a skúma sa pod mikroskopom, pričom sa spočíta počet vajíčok helmintov. Počet vajíčok v 1 cm 3 (1 g) výkalov, počet nájdených vajíčok sa vynásobí 200 (ak sa skúmalo 0,075 ml zmesi) alebo 150 (ak 0,1 ml zmesi).

Helmintolarvoskopické štúdie sa používajú na diagnostiku diktyokaulózy, mulleriázy a iných protostrongylidóz, ako aj strongylatóz tráviaci trakt prežúvavcov a strongyloidózy u rôznych zvierat.

Bermanova a Orlovova metóda. 10 g fekálií sa umiestni do lievikov Bermanovho prístroja na kovovú sieťku alebo sa zabalí do kúskov gázy. Nalejte vodu pri izbovej teplote a nechajte 3-6 hodín. Počas tejto doby larvy vylezú zo vzorky do kvapaliny a zostúpia cez skúmavku na dno skúmavky. Kvapalina zo skúmavky sa vypustí a odsaje. Zrazenina sa po pretrepaní naleje na sklíčko a mikroskopicky pri malom zväčšení mikroskopu. Larvy háďatiek sú mobilné a ľahko zistiteľné.

Zjednodušená modifikácia Bermanovej metódy (podľa Shilnikova). Vzorky výkalov sa umiestnia do pohára s vodou a zabalia sa do gázových obrúskov. Po 3-6 hodinách sa vzorky odoberú, kvapalina sa nechá 10-15 minút usadzovať, potom sa priehľadná vrstva vody odsaje pipetou. Potom sa kvapka sedimentu napipetuje na podložné sklíčko na mikroskopiu.

Sedimentačná metóda s centrifugáciou.(expresná metóda podľa Kotelnikova a iných). 3-5 g trusu sa umiestni do skúmaviek s vodou (20-25 °C) a odstreďuje sa (1000-1500 ot./min.) 2 minúty. Potom sa voda vypustí a sediment sa pretrepe, naleje na podložné sklo a skúma sa na prítomnosť lariev.

Waydova metóda. Niekoľko guľôčok výkalov oviec, kôz sa umiestni na podložné sklíčko alebo hodinové sklíčko a pridá sa voda s teplotou 40 ° C. Po 40 minútach sa guľôčky odstránia a kvapalina zostávajúca na skle sa skúma pod mikroskopom prítomnosť lariev háďatka. Objavené rôzne metódy larvy treba odlíšiť.

Krvný test podľa Kulikova. Z krčnej žily sa odoberie 20 ml krvi a pridajú sa 2 ml 3,8 % vodného roztoku citrátu sodného a nechá sa stáť 20-25 minút. Vytvárajú sa 3 vrstvy: spodná sú usadené erytrocyty, stredná sú leukocyty a larvy háďatiek a horná je sérum. Tenkou pipetou odoberte obsah strednej vrstvy, po kvapkách nasypte na podložné sklíčko, prikryte krycím sklíčkom a pozrite sa pod mikroskop.

Štúdium krvi dobytka (podľa Stewarda). Pokožku zbavíme chĺpkov, miesto vydezinfikujeme. Šupku stiahneme pinzetou a odstrihneme zahnutými nožnicami povrchová vrstva. Umiestnite na podložné sklíčko do kvapky fyziologického roztoku a opatrne rozdeľte pitevnými ihlami. Kvapalina sa skúma pod mikroskopom.

Štúdium kože koní podľa R.S. Chebotareva. Na kohútiku, ramene a iných miestach sa vyberie oblasť kože o veľkosti 5 cm 2, dezinfikovaná alkoholom. Kožu zachytíme v záhybe, odrežeme kúsok s hrúbkou 3-4 mm a plochou 2-3 cm 2. Rezy sa vložia do skúmavky a naplnia sa 2-3 ml fyziologického roztoku a nechajú sa niekoľko hodín v termostate pri 36-37 o C alebo pri izbovej teplote. Potom sa obsah skúmavky naleje na hodinové sklíčko a skúma sa pod mikroskopom, aby sa zistili larvy onchocercia.

Imunobiologická diagnostika. V praxi využívajú alergické reakcie na diagnostiku tkanivových helmintiáz alebo takzvanej larválnej cestodózy, ako je echinokokóza, cenuróza, cysticerkóza, ako aj nematodózy, ako je trichinelóza. Na tento účel sa používa intradermálny test. Ako antigén sa odporúča tekutina z lariev (pľuzgiere) alebo extrakty z Trichinella a ich lariev.

V súčasnosti sa veľká pozornosť venuje vývoju a používaniu sérologických testov s použitím živých lariev helmintov ako antigénov. Podľa tohto princípu sa mikroprecipitačné reakcie uskutočňujú na živých larvách háďatiek s háďatkami, na cerkáriách - s trematódami, onkosférami a skolexami - s larválnou cestodózou. Ďalší princíp sérologických reakcií je spojený s použitím somatických antigénov. Aplikujte reakcie hemaglutinácie a flokulácie (aglutinácie) s adsorbovanými antigénmi. Ako adsorbenty sa používajú karmín, bentonit a latexová syntetická živica.

Rôzne sérologické reakcie sú: skolexoprecipitačná reakcia (RScP), ktorú vyvinuli R. S. Schultz a R. G. Ismagilova na diagnostiku echinokokózy oviec. Ďalšie reakcie: RNGA, RZGA atď.

Diagnostické odčervenie je metóda výskumu makrohelmintoskopie. Používa sa pri podozrení na monieziózu, tysanieziózu, avitellinózu prežúvavcov, anoplocefalidózu koní, mäsožravú teniidózu, drepanidoteniazu vodného vtáctva, askariózu ošípaných, askariózu kurčiat a iné malé skupiny zvierat; najpodozrivejších z ochorenia sa podáva vhodné antihelmintikum v terapeutickej alebo nízkej dávke. Zvieratá sa pozorujú a všetky vylučované výkaly sa kontrolujú na zistenie helmintov alebo ich fragmentov, ktoré sa ďalej skúmajú.

A nakoniec metódy výskumu iných orgánov.

Analýza moču: s dioktofimózou obličiek, kapilárou močového mechúra. Moč je potrebné predbežne vyšetriť makroskopicky alebo lupou na prítomnosť helmintov alebo ich fragmentov. Moč sa zriedi na polovicu destilovanou vodou a odstredí sa 2-3 minúty, kvapalina sa vypustí a zrazenina sa nanesie na podložné sklíčka a vyšetrí sa.

Vyšetrenie obsahu priedušnice vtákov: v ňom sú jasne viditeľné syngamy alebo cyatostómy, ktoré majú zvyčajne jasne červenú farbu.

Štúdium očnej komory. Intravitálna diagnostika setariózy očí koní a hovädzieho dobytka - vykonaná makroskopické vyšetrenie predná komora postihnutého oka, kde je vidieť voľne plávajúce setárium (5-10 cm) a je dobre priesvitné aj cez zakalenú rohovku.

Vyšetrenie povrchového zoškrabania z perianálnych záhybov: tyčinka alebo zápalka navlhčená 50 % vodným roztokom glycerínu sa zoškrabú z perianálnych záhybov pomocou vnútri koreňa chvosta a z perinea. Zoškrabanie sa prenesie na podložné sklíčko v 2-3 kvapkách glycerolu (1:1 vo vode), prikryje sa krycím sklíčkom a pod mikroskopom sa vyšetrí na prítomnosť oxyurátových vajíčok.

Metódy postmortálnej diagnostiky helmintiáz

— patologické a histologické štúdie. Postmortálna diagnostika helmintiáz rôznych štádiách ich vývoj v orgánoch a tkanivách zvierat. Najpokročilejšiu metódu helmintologickej pitvy vyvinul K.I. Skryaby. Rozlišujte plnú a neúplnú helmintologickú pitvu.

Úplná helmintologická pitva - najviac spoľahlivá metóda, ktorý umožňuje kvantitatívne aj kvalitatívne zaúčtovanie všetkých helmintov, ktoré napádajú zviera.

esencia túto metódu: po odstránení kože z mŕtvoly dôkladne preskúmajte podkožného tkaniva, potom otvorte hrudník a brušná dutina a extrahovať všetky orgány systémov: tráviaci, dýchací systém, obehové, močové atď.

Orgány sa oddelia a vyšetria oddelene pomocou metódy postupných výplachov. Parenchymálne orgány (pečeň, pľúca, pankreas, obličky atď.) sa umiestnia do samostatnej misky a premenia sa na mleté ​​mäso, ktoré sa trhá rukami alebo krája nožom alebo nožnicami na malé kúsky. Ďalej sa tento detritus premyje vodou alebo fyziologickým roztokom pomocou metódy postupných premývaní. Výsledná zrazenina sa študuje v malých častiach, najprv v čiernej a potom v bielych kyvetách alebo v Petriho miskách na čiernobielom pozadí. Veľké helminty sa vyberajú vizuálne a malé - pomocou ručnej lupy so zväčšením 8-10x. Zbierajte helminty iba pomocou štetca alebo pitevných ihiel, ale nie pomocou pinzety a nepálky.

NPHV je zjednodušená helmintologická pitva, počas ktorej sa z orgánov a tkanív odstraňujú iba jednotlivé helminty, ktoré výrazne vyčnievajú. Používa sa aj na získavanie muzeálnych materiálov.

Helmintologické štúdie environmentálnych objektov. Zber, konzervovanie a expedícia helmintov. Fixácia, farbenie helmintov a príprava trvalých mikropreparátov z nich. Príprava múzejných makropreparátov. Laboratórna diagnostika trematodóza. Diagnóza: fasciolóza, dikroceliáza, opisthorchiáza, paramfistomatóza, prostogonimóza vtákov, echinostomóza kačíc a husí.