Coombsi test on positiivne. Otsese Coombsi testi omadused ja tulemuste tõlgendamine

Otsene Coombsi test ( antiglobuliini test) - positiivne reaktsioon määrab autoimmuunse hemolüütilise aneemiaga patsientide veres erütrotsüütide pinnale fikseeritud antikehad (anti-erütrotsüütide antikehad - anti-D, C, E, c ja e) või komplemendi komponendid. Negatiivne reaktsioon ei välista immuunhaigus, kuna antikehi võib leida vabal kujul plasmast (ei ole seotud punaste verelibledega). Nende tuvastamiseks viiakse läbi kaudne Coombsi test.

Näidustused: immuunse iseloomu määramine hemolüütiline aneemia.

Positiivne reaktsioon väljendub selles, et haige inimese erütrotsüüdid, millele on fikseeritud antikehad, aglutineeruvad interakteerudes pärast küüliku immuniseerimist saadud antiglobuliini seerumiga (antikehade vastu). Otsene Coombsi test tehakse siis, kui on alust arvata, et uuritavad erütrotsüüdid on juba in vivo sensibiliseeritud vastavate antikehadega, s.t. reaktsiooni esimene faas - antikehade fikseerimine erütrotsüütide pinnal on juba toimunud ja antiglobuliini seerumi lisamine põhjustab sensibiliseeritud rakkude aglutinatsiooni. Teisisõnu, positiivne otsene Coombsi test tähendab, et in vivo on erütrotsüütide pinnal kaetud immunoglobuliinid või komplement.

Otsese Coombsi testi abil tuvastatakse punaste vereliblede pinnal immunoglobuliinid (antikehad). Need on immunoglobuliinid, mis moodustuvad vastusena sensibiliseerimisele mis tahes antigeenide, näiteks Rh faktori suhtes. Proovi seadistamiseks lisatakse pestud erütrotsüütidele antiglobuliiniga seerumit (Coombsi seerum). Kui erütrotsüütidel on immunoglobuliinid või komplement, tekib aglutinatsioon. Testi nimetatakse otseseks, kuna see on üheetapiline - see nõuab ainult Coombsi seerumi lisamist pestud punastele verelibledele.

Paljudest olemasolevatest antigeenidest meditsiinipraktika kõrgeim väärtus antakse kolme tüüpi vere aglutinogeenidele. Üks neist on Rh-faktori avaldumise eest vastutav tüüp: kui see on erütrotsüütide membraanil, diagnoositakse Rh + veregrupp, kui see puudub - Rh-. Kui Rh + aglutinogeenidega erütrotsüüdid satuvad Rh-negatiivse vere koostisse, vallandab organism immuunvastuse ja hakkab tootma selle antigeeni vastu antikehi, mis põhjustab patoloogilisi seisundeid.

VIIDE! Rh-faktor on mitmekümnest antigeenist koosnev kompleksne mitmekomponentne süsteem. Kõige levinumad neist on D-tüüpi aglutinogeenid (85% juhtudest), samuti E ja C.

Coombsi test viiakse läbi ainult otseste näidustuste olemasolul. Ühine nimekiri Coombsi testi määramise põhjused:

• raseduse planeerimine ja juhtimine (vanemate Rh on erinev);
• annetamine ja vereülekandeks ettevalmistamine (vere mittevastavus Rh-s ei ole vähem kahjulik kui mittevastavus AB0 süsteemis);
• planeeritud kirurgiline sekkumine(verekaotuse täiendamise korral vereülekande abil);
• hemolüütiliste haiguste diagnoosimine.

Täpsemad näidustused sõltuvad läbiviidava uuringu tüübist.

Otsene Coombsi test

Otsene test tuvastab punaste vereliblede pinnal olevad antikehad. See on vajalik olemasoleva diagnoosimiseks hemolüütilised patoloogiad:

• autoimmuunne (organismi enda antikehade rünnaku tagajärjel hävivad erütrotsüüdid ja hemoglobiin);
• meditsiiniline ( patoloogiline protsess hakkab mõnda võtma ravimid kinidiini või prokaiinamiidi tüüpi);
• pärast vereülekannet (veregrupi mittevastavusega vereülekande ajal), samuti Rh-konflikti kujul raseduse ajal (vastsündinute erütroblastoos).

VIIDE! Hemolüütiline aneemia on haigus, mis on seotud punaste vereliblede enneaegse hävimisega hemolüüsi tagajärjel, mis põhjustab vere ebapiisavat küllastumist hapnikuga ning aju ja/või siseorganite hüpoksiat.

Vererakkude hemolüüsi täheldatakse onkoloogiliste, nakkushaiguste ja reumaatiliste haiguste korral, seega võib otsest Coombsi testi kasutada täiendav abinõu diagnostika patoloogiline seisund. Samal ajal tasub meeles pidada: analüüsi negatiivne väärtus ei välista hemolüüsi võimalust, kuid on põhjus täiendavaks uuringuks.

Kaudne Coombsi test

Patoloogiliste olukordade vältimiseks kasutatakse sagedamini kaudset testi. See aitab tuvastada vereplasmas antikehi, mis on vajalik vereülekandega ühilduvuse hindamiseks ja Rh-konflikti riskide diagnoosimiseks raseduse ajal.

Rohkem kui 80% inimestest on vastavalt positiivne Rh-tegur (Rh +), veidi alla 20% on Rh-negatiivne. Kui Rh-emal areneb Rh+ laps, hakkab tema keha tootma antikehi, mis ründavad loote punaseid vereliblesid, põhjustades hemolüüsi.

Võttes arvesse asjaolu, et "erineva reesus" abielude protsent ulatub 12-15% -ni, peaks vastsündinu hemolüütilise haiguse risk olema kõrge, kuid tegelikkuses on see nähtus naistel vaid ühel 25-st sellisest juhtumist. täheldatakse sensibiliseerimist (200 eduka sünnituse puhul 1 hemolüütilise patoloogia näide). See on osaliselt tingitud asjaolust, et esimene Rh-positiivne laps ei põhjusta tavaliselt ema keha avatud agressiooni; valdav enamus juhtudest esineb teisel ja järgnevatel lastel. Kehtib sama põhimõte, mis konkreetse allergeeni suhtes tavapärase sensibiliseerimise puhul.

Esimesel kokkupuutel reaktsiooni ei toimu. Keha tutvub ainult selle jaoks uue antigeeniga, mis toodab IgM-klassi antikehi, mis vastutavad kiire immuunvastuse eest, kuid harva tungivad läbi platsentaarbarjääri lapse verre. Kõik patoloogilised reaktsioonid ilmnevad korduval "kohtumisel", kui kehas hakkavad tootma IgG klassi antikehad, mis tungivad kergesti loote vereringesse, alustades hemolüüsi protsessi.

Kaudne Coombsi test raseduse ajal võimaldab tuvastada antikehade olemasolu ema kehas ja õigeaegselt tuvastada esialgne etapp sensibiliseerimine. Positiivne vastus nõuab registreerimist igakuise antikehade tiitri uuringuga ja kohustuslikku haiglaravi 3-4 nädalat enne sünnitust.

VIIDE! Rh-faktori kokkusobimatus ei mõjuta kuidagi ema seisundit, hemolüütiline haigus areneb ainult lapsel. Rasketel juhtudel ja õigeaegse reageerimise puudumisel võib loode surra juba üsas või vahetult pärast sündi.

Protseduuri ettevalmistamine ja selle läbiviimine

Diagnoosimiseks kasutatakse venoosset verd. Spetsiaalne pikaajaline ettevalmistus Coombsi testiks ei ole vajalik. Enne veenist analüüsimiseks vere võtmist proovige järgida standardreegleid:

• loobuma alkoholist 3 päevaks, ravimid(kui võimalik);
• planeerige viimane söögikord hilisemaks kui 8 tundi enne vereanalüüsi võtmist;
• loobuma suitsetamisest, füüsilisest, vaimsest ja emotsionaalsest stressist 1 tunni jooksul;
• Enne protseduuri juua klaas puhast gaseerimata vett.

Uurimismeetod põhineb hemaglutinatsioonireaktsioonil.

Otsese testi läbiviimisel vereproovi eksponeeritakse eelnevalt valmistatud antiglobuliini seerumiga, millel on teadaolevad indikaatorid, segu hoitakse mõnda aega ja kontrollitakse aglutinaatide suhtes, mis tekivad antikehade esinemisel erütrotsüütidel. Aglutinaatide taset diagnoositakse aglutineeriva tiitri abil.

Kaudne test Coombsil on sarnane tehnika, kuid tegevuste jada on keerulisem. Eraldatud vereseerumisse viiakse antigeensed erütrotsüüdid (Rh faktoriga) ja alles pärast neid manipuleerimisi lisatakse diagnoosimiseks ja aglutinaatide tiitriks antiglobuliini seerum.

Uurimistulemused

Tavaliselt on nii otsene kui kaudne Coombsi test peaks andma negatiivne tulemus:

• negatiivne otsetesti näitab, et veres puuduvad punaste verelibledega seotud Rh-faktori spetsiifilised antikehad ja need ei saa olla hemolüüsi põhjuseks
• negatiivne kaudne test näitab, et vereplasmas pole ka Rh-faktori vabu antikehi; fakt näitab doonori vere sobivust retsipiendi verega (või ema ja lapse verega) Rh faktori järgi.

Positiivne Coombsi test näitab keha Rh-sensibiliseerimise fakti, mis on peamine põhjus Rh-konflikt vereülekande korral või erineva Rh-staatusega lapse kandmisel. Sel juhul jäävad tulemused muutumatuks 3 kuud (erütrotsüütide eluiga). Kui põhjuseks on autoimmuunne hemolüütiline aneemia, võib positiivne test patsienti mitu aastat (mõnel juhul kogu elu) kummitada.

VIIDE! Antiglobuliini test on väga tundlik, kuid sellel on vähe teavet. See ei registreeri hemolüütilise protsessi aktiivsust, ei määra antikeha tüüpi ega suuda tuvastada patoloogia põhjust. Täielikuma pildi saamiseks peab raviarst määrama täiendavad uuringud( vere mikroskoopia, üldine ja biokeemiline analüüs, reumaatilised testid, ESR, raua ja ferritiini tase).

Sensibiliseerimise astmel võib olla kvalitatiivne väljend ("+" kuni "++++") või kvantitatiivne - pealdise kujul:

• 1:2 - väike väärtus, ei kujuta endast ohtu;
• 1:4 - 1:8 - immunoloogilise reaktsiooni arengu algus; ei kujuta endast ohtu, kuid nõuab pidevat jälgimist;
• 1:16 -1:1024 - sensibiliseerimise ere vorm, meetmeid tuleks võtta kohe.

Positiivse testi põhjus võib olla:

• tüpiseerimata vere ülekanne (või tüüpveaga), kui doonori ja retsipiendi Rh-tegur ei ühti;
• Reesuskonflikt raseduse ajal (kui isa ja ema vere antigeenide koostis ei ühti);
• autoimmuunne hemolüütiline aneemia - nii kaasasündinud (esmane) kui ka sekundaarne, mis on teatud haiguste tagajärg (Evansi sündroom, nakkuslik kopsupõletik, süüfilis, külm hemoglobinuuria, lümfoom);
• ravimi hemolüütiline reaktsioon.

Ükski ülaltoodud probleemidest ei saa patsient lahendada ilma arstiabi. Kõigil juhtudel on vajalik kiireloomuline konsultatsioon, registreerimine või erakorraline haiglaravi.

TÄHELEPANU! AT harvad juhud Valepositiivne Coombsi test on võimalik. Selle põhjuseks võivad olla sagedased vereülekanded, aga ka mitmed haigused: reumatoidartriit, erütematoosluupus, sarkoidoos. Seda nähtust võib täheldada ka pärast põrna eemaldamist, samuti reaktsiooni kulgu rikkumist (sisu sagedane raputamine, saasteainete olemasolu).

Hemolüütiline aneemia, mida põhjustavad autoimmuunkehad, mis on suunatud nende enda punaste vereliblede vastu, pole täpselt välja selgitatud. Siiski eeldatakse, et mõned tegurid (näiteks viirus, ebanormaalne valk) muudavad erütrotsüüte nii, et keha tajub neid juba "millegi võõrana" ja saab antikehade abil nendega hakkama. Teise teooria kohaselt tekivad erütrotsüütide vastu suunatud antikehad peaaegu juhuslikult teatud haiguste korral ebanormaalsete plasmavalgukehade moodustumisel. Sellised valgukehad võivad samamoodi "kogemata" anda reaktsioone, mida saab kasutada diagnoosi panemiseks (nt. viiruslik kopsupõletik teadaolevalt annab positiivse Wassermanni testi, positiivse Paul-Bunneli testi ja külma aglutinatsiooni testi).

On kaks autoantikehade peamised tüübid hemolüütilise aneemiaga, nimelt: soojad antikehad (reageerivad temperatuuril 37 °) ja külmad antikehad (mille reaktsioonivõime suureneb, kui temperatuur läheneb nullile). Soojad antikehad on tavalisemad kui külmad. Dacie leidis, et soojad hemolüsiinid on kaks korda tavalisemad kui külmad hemolüsiinid. Hemolüsiinid ja aglutiniinid ei ole põhimõtteliselt erinevad antikehad: need erinevad ainult oma toime olemuse poolest. Aglutiniinid aglutineerivad punaseid vereliblesid ja hemolüsiinid muudavad need vastuvõtlikumaks keerulisele hemolüüsiprotsessile (täiendus!). Autoantikehad, fikseerides erütrotsüütidele, moodustavad erütrotsüütide-globiini kompleksi. See kompleks tuvastatakse Coombsi antiglobiini testi abil.

Coombsi test läbi viidud Coombsi seerumiga, mille valmistamiseks sensibiliseeritakse küülik inimese seerumiga, mille vastu moodustuvad küüliku seerumis antikehad. Sellise sensibiliseeritud seerumi toimel inimese erütrotsüütidele toimub nende aglutinatsioon, kui erütrotsüütide retseptorid on hõivatud blokeerivate antikehadega. Kuna need blokeerivad antikehad pärinevad inimese seerumist, aglutineeruvad need inimese plasma suhtes sensibiliseeritud ja sademeid sisaldava küüliku seerumiga. Seda reaktsiooni nimetatakse Coombsi testiks; hemolüütilise aneemia puhul autoimmuunkehade alusel (Lo tit) on see peaaegu spetsiifiline (vt täpsemalt Maier).

Üldiselt hemolüütilise aneemiaga erütrotsüütide esmase rikkumisega on Coombsi test negatiivne ja omandatud testidega positiivne. Sellest reeglist on siiski mõned erandid: põhiseadusliku hemolüütilise aneemia kriiside ajal leiti valepositiivne Coombsi test ja madal aste- mõnikord ka pärast splenektoomiat, reumaatilise palaviku, sarkoidoosi, sagedaste vereülekannete ja süsteemse erütematoosluupuse korral. Loomulikult on omandatud hemolüütilise aneemia korral ilma autoimmuunkehade moodustumiseta negatiivne.

Hemolüütiline aneemia Autoimmuunkehade põhjustatud haigused võib jagada järgmisteks osadeks:
a) äge, alaäge ja kroonilised vormid, samuti edasi
b) teadmata etioloogiaga idiopaatiline ja c) sümptomaatiline [viiruslik kopsupõletik (ainult külma aglutiniinid), krooniline lümfoidne leukeemia, retikulosarkoom, lümfosarkoom, süsteemne erütematoosluupus (peamiselt soojad, harva külmad aglutiniinid), süüfilis (külma aglutiniinid (M) töötajad)).
c) sümptomaatiline [viiruslik kopsupõletik (ainult külmad aglutiniinid), krooniline lümfoidne leukeemia, retikulosarkoom, lümfosarkoom, süsteemne erütematoosluupus (valdavalt soojad, harvem külmad aglutiniinid), süüfilis (külma aglutiniinid), munasarjakasvajad (Miescher et al.)).

Hemolüütilise aneemia kliinik autoimmuunkehade mõjul arenev on väga mitmekesine ja seetõttu on vaevalt võimalik nende üldist välja tuua. kliiniline pilt. Mõjutatud on igas vanuses ja mõlemast soost inimesed ühtlaselt. Siiski näivad idiopaatilised vormid olevat sagedamini naistel (Sacks ja Workman).

Idiopaatilise vormi kliiniline pilt varieerub sõltuvalt haiguse tõsidusest. Kroonilistel juhtudel algab haigus järk-järgult, haigus kestab aastaid sagedased ägenemised. Aneemia raskusaste varieerub sõltuvalt hemolüüsi astmest. Täheldatakse hemoglobiini langust kuni 10%, muudel juhtudel säilib hemoglobiin pikka aega 50–60%. Retikutsütoosi intensiivsus ning naha ja seerumi ikteriline värvus vastab hemolüüsi astmele. Bilirubiini leidub uriinis väga harva, kuna see ei läbi neere, kuid täheldatakse hemoglobinuuriat. Kroonilistel juhtudel on põrn sageli laienenud ja võib ulatuda isegi väga märkimisväärse suuruseni, samal ajal kui muudel juhtudel on see endiselt käegakatsutav. Maks on harva suurenenud.

Enamikul juhtudel veres on näha makrotsütoosi ägedad staadiumid samuti on palju mikrotsüüte, normoblastoos ja polükromaasia puuduvad harva, leukotsütoos võib ulatuda 30 000-ni, trombotsüütide arv on normaalne. Mõnel juhul on aga märgatav trombotsütopeenia. Evans selgitab neid juhtumeid trombotsüütide vastaste antikehade samaaegse esinemisega, mistõttu esineb nii hemolüütiline aneemia kui ka trombotsütopeenia autoimmuunkehade toimest – Evansi sündroom (Evans). Osmootne resistentsus on veidi vähenenud, kuid mitte samal määral ja mitte nii püsivalt kui põhiseadusliku sfäärilise raku aneemia korral. Kuumakindluse test (Hegglin-Maier) 6 tunni pärast võib samuti anda kerge hemolüüsi (oma vaatlus), kuid vähemal määral kui Marchiafava aneemia korral. Hemosideriini leidub ka uriinis (oma vaatlus).

- antiglobuliinitest, mille eesmärk on tuvastada Rh-negatiivses veres mittetäielikud erütrotsüütide vastased antikehad Rh-faktori vastu - spetsiifiline valk, mis asub Rh-positiivse vere erütrotsüütide pinnal. Seda testi on kahte tüüpi: otsene - punaste vereliblede pinnal olevate antikehade tuvastamine, kaudne - antikehade tuvastamine vereseerumis. Otsene test viiakse läbi verehaiguste diagnoosimisel ja ravi jälgimisel: hemolüütiline aneemia, vastsündinu hemolüütiline haigus jt. Kaudne test viiakse läbi, et hinnata doonori ja retsipiendi vere kokkusobivust vereülekande ajal, samuti teha kindlaks Rh-konflikti olemasolu ja oht raseduse planeerimisel ja juhtimisel. Coombsi testi materjal on hapnikuvaba veri, viiakse uuring läbi aglutinatsioonireaktsioonil põhinevate meetoditega. Tavaliselt annavad mõlemad testid negatiivse tulemuse. Analüüs tehakse ühe päeva jooksul. Kokku oli Moskvas 89 aadressi, kus seda analüüsi teha sai.

- antiglobuliinitest, mille eesmärk on tuvastada Rh-negatiivses veres mittetäielikud erütrotsüütide vastased antikehad Rh-faktori vastu - spetsiifiline valk, mis asub Rh-positiivse vere erütrotsüütide pinnal. Seda testi on kahte tüüpi: otsene - punaste vereliblede pinnal olevate antikehade tuvastamine, kaudne - antikehade tuvastamine vereseerumis. Otsene test viiakse läbi verehaiguste diagnoosimisel ja ravi jälgimisel: hemolüütiline aneemia, vastsündinu hemolüütiline haigus jt. Kaudne test viiakse läbi, et hinnata doonori ja retsipiendi vere kokkusobivust vereülekande ajal, samuti teha kindlaks Rh-konflikti olemasolu ja oht raseduse planeerimisel ja juhtimisel. Coombsi testi materjaliks on venoosne veri, uuring viiakse läbi aglutinatsioonireaktsioonil põhinevate meetoditega. Tavaliselt annavad mõlemad testid negatiivse tulemuse. Analüüs tehakse ühe päeva jooksul.

Coombsi test - kliinilises uuringus Rh-negatiivne veri, mille eesmärk on tuvastada Rh-faktori vastased antikehad. Testi kasutatakse reesuskonflikti ja hemolüütiliste reaktsioonide tekkeriski tuvastamiseks. Iga inimese erütrotsüütide pind sisaldab teatud komplekti antigeene ehk aglutinogeene – erineva iseloomuga ühendeid, mille olemasolu või puudumist kasutatakse veregrupi ja Rh faktori üle otsustamisel. Antigeene on palju, meditsiinipraktikas on suurima praktilise tähtsusega aglutinogeenid A ja B, mis määravad veregrupi, ning aglutinogeen D, Rh-faktor. Positiivse Rh-faktoriga tuvastatakse D-antigeenid erütrotsüütide välismembraanil, negatiivsega - ei.

Coombsi test, mida nimetatakse ka antiglobuliinitestiks, on suunatud mittetäielike erütrotsüütide vastaste antikehade tuvastamisele veres Rh faktori süsteemi vastu. Rh-faktori antikehad on spetsiifilised immunoglobuliinid, mis tekivad Rh-negatiivses veres D-aglutinogeenidega erütrotsüütide sisenemisel.See võib juhtuda loote ja raseda vere segunemisel, kusjuures vereülekannet tehakse ilma eelneva veregrupi määramiseta. Coombsi test on olemas kahes versioonis – otsene ja kaudne. Otsese Coombsi testi tegemisel tuvastatakse punaste vereliblede pinnale kinnitunud antikehad. Uuringut kasutatakse hemolüütilise reaktsiooni põhjuse väljaselgitamiseks. Kaudne Coombsi test on suunatud erütrotsüütide vastaste antikehade tuvastamisele vereplasmas. Vajalik on kindlaks teha doonori ja retsipiendi või ema ja loote vere sobivus, see aitab vältida reesuskonflikti teket ja sellele järgnevat punaste vereliblede hemolüüsi.

Coombsi testi mõlema variandi jaoks võetakse veri veenist. Analüüs viiakse läbi aglutinatsioonimeetodil, kasutades antiglobuliini seerumit. Uuringu tulemusi kasutatakse hematoloogias hemolüütiliste reaktsioonide põhjuste väljaselgitamisel, kirurgias ja elustamises vereülekande ajal, sünnitusabis ja günekoloogias Rh-negatiivse verega naiste raseduste jälgimisel.

Näidustused

Otsene Coombsi test, mis tuvastab punaste vereliblede pinnale kinnitunud antikehad, on ette nähtud hemolüütiliste reaktsioonide (punaste vereliblede hävitamise) korral. erinevat päritolu. Uuring on näidustatud primaarse autoimmuunse hemolüütilise aneemia, vereülekandejärgse hemolüütilise aneemia, vastsündinu hemolüütilise haiguse, autoimmuun-, kasvaja- või punaliblede hemolüüsi korral. nakkushaigused, samuti vastuvõtmine ravimid nt kinidiin, metüüldopa, prokaiinamiid. Reesuskonflikti tekke ärahoidmiseks kasutatakse kaudset Coombsi testi, mis tuvastab vereplasmas olevad antikehad. See on näidustatud patsientidele, kes valmistuvad vereülekanneteks, samuti rasedatele naistele, kellel on negatiivne Rh-faktor, eeldusel, et lapse tulevasel isal on positiivne Rh-tegur.

Rh-ühilduvuse kindlakstegemiseks ei tehta Coombsi testi Rh-positiivse verega patsientidele. Nendel juhtudel on punaliblede pinnal juba antigeenid, antikehade teket ei saa käivitada vereülekanne ega lootevere sattumine raseda vereringesse. Samuti ei ole uuring näidustatud rasedatele naistele, kui mõlemal vanemal on negatiivne Rh tegur ehk pärilik retsessiivne tunnus. Selliste paaride lapsel on alati Rh-negatiivne veri, immunoloogiline konflikt emaga on võimatu. Hemolüütiliste patoloogiate korral ei kasutata antiglobuliinitesti ravi edukuse jälgimiseks, kuna tulemused ei kajasta erütrotsüütide hävitamise protsessi aktiivsust.

Coombsi testi piiranguks on uurimisprotseduuri keerukus – usaldusväärsete tulemuste saamiseks on vaja järgida temperatuuri- ja ajatingimusi, reaktiivide ja biomaterjali valmistamise reegleid. Coombsi testi eeliseks on selle kõrge tundlikkus. Hemolüütilise aneemia korral jäävad selle testi tulemused positiivseks, isegi kui hemoglobiin, bilirubiin ja retikulotsüüdid normaliseeruvad.

Ettevalmistus analüüsiks ja materjali kogumiseks

Coombsi testi läbiviimise materjaliks on venoosne veri. Vereproovi võtmise ajale ja patsiendi ettevalmistusele erinõudeid ei ole. Nagu iga uuringu puhul, on soovitatav pärast söömist teha vähemalt 4-tunnine paus ja viimase 30 minuti jooksul suitsetamisest loobuda. kehaline aktiivsus vältida emotsionaalset stressi. Samuti tasub eelnevalt arstiga arutada vajadust lõpetada ravimite võtmine – mõned ravimid võivad Coombsi testi tulemusi moonutada. Süstlaga võetakse verd kubitaalveenist, harvem edasi veenist tagakülg pintslid. Mõne tunni jooksul toimetatakse materjal laborisse.

Otsese Coombsi testi tegemisel lisatakse patsiendi vereseerumile antiglobuliini seerumit. Mõne aja pärast uuritakse segu aglutinaatide olemasolu suhtes – need tekivad, kui punalibledel on antikehad. Positiivse tulemuse korral määratakse aglutineeriv tiiter. Kaudne Coombsi test koosneb rohkem etapid. Esiteks fikseeritakse seerumis olevad antikehad süstitud erütrotsüütidele inkubeerimise ajal. Seejärel lisatakse proovile antiglobuliini seerum, mõne aja pärast määratakse aglutinaatide olemasolu ja tiiter. Analüüsiperiood on 1 päev.

Normaalsed tulemused

Tavaliselt on otsese Coombsi testi tulemus negatiivne (-). See tähendab, et veres ei ole punaste verelibledega seotud antikehi ja need ei saa olla hemolüüsi põhjuseks. Normaalne tulemus kaudne Coombsi test on samuti negatiivne (-), see tähendab, et vereplasmas pole Rh-faktori antikehi. Retsipiendile vereülekandeks valmistumisel tähendab see sobivust doonori verega, raseduse jälgimisel - ema Rh-sensibiliseerimise puudumist, väikest immunoloogilise konflikti tekke riski. Füsioloogilised tegurid nagu toitumisharjumused või kehaline aktiivsus, ei saa testi tulemust mõjutada. Seega, kui tulemus on positiivne, on vajalik arsti konsultatsioon.

Analüüsi diagnostiline väärtus

Positiivset Coombsi testi tulemust väljendatakse kvalitatiivselt (+) kuni (++++) või kvantitatiivselt tiitrites 1:16 kuni 1:256. Antikehade kontsentratsiooni määramine erütrotsüütidel ja vereseerumis tehakse mõlemat tüüpi proovides. Otsese Coombsi testi positiivse tulemuse korral tuvastatakse punaste vereliblede välismembraanil antikehad, mis põhjustavad nende vererakkude hävimise. Põhjuseks võib olla vereülekanne ilma eelneva tüpiseerimiseta – vereülekandejärgne hemolüütiline reaktsioon, samuti vastsündinu erütroblastoos, ravimite tarvitamisest tingitud hemolüütiline reaktsioon, primaarne või sekundaarne autoimmuunne hemolüütiline aneemia. Erütrotsüütide sekundaarset hävingut võivad põhjustada süsteemne erütematoosluupus, Evansi sündroom, Waldenströmi makroglobulineemia, paroksüsmaalne külma hemoglobinuuria, krooniline lümfotsütaarne leukeemia, lümfoom, nakkuslik mononukleoos, süüfilis, mükoplasma kopsupõletik.

Kaudse Coombsi testi positiivne tulemus näitab Rh-faktori vastaste antikehade olemasolu plasmas. Praktikas tähendab see, et on toimunud Rh sensibiliseerimine, pärast doonorivere infusiooni raseduse ajal on võimalik Rh-konflikt. Rasedusprobleemide vältimiseks naistel, kellel on positiivne tulemus Coombsi test pannakse spetsiaalsele kontole.

Normist kõrvalekallete ravi

Coombsi test viitab isoseroloogilistele uuringutele. Selle tulemused võimaldavad tuvastada hemolüütilist reaktsiooni, samuti määrata doonori ja retsipiendi, ema ja loote vere kokkusobivust, et vältida reesuskonflikti tekkimist. Kui testi tulemus on positiivne, on vaja nõu küsida raviarstilt - sünnitusabi-günekoloogilt, hematoloogilt, kirurgilt.

Taldrikule või slaidile kantakse pipettidega (erinevad!) 1 suur tilk O (I), A (II), B (III) seerumit. Märkamisaeg, puhas klaaspulk või klaasklaasi puhta nurga all kombineeritakse seerumitilgad veretilkadega. Määramine kestab 5 minutit plaati loksutades, seejärel lisatakse igale tilkade segule 1 tilk soolalahust ja tulemusi hinnatakse. Parem on, kui seerum on 2 erinevat seeriat. Veregrupi tulemused peavad ühtima mõlema seerumi seeriaga.

Isohemaglutinatsiooni tulemuste hindamine:

isohemaglutinatsioon. Positiivse reaktsiooni korral ilmuvad segusse pisikesed punased kleepuvate punaste vereliblede terakesed. Terad sulanduvad suuremateks teradeks, viimased aga helvesteks. Seerum on peaaegu värvi muutnud;

negatiivse reaktsiooni korral jääb segu ühtlase värvusega 5 minutiga roosa värv ja teri ei leita;

Töötades 3 rühma O(I), A(II), B(III) seerumiga, on võimalik 4 reaktsioonide kombinatsiooni:

1. kui kõik 3 seerumit andsid negatiivse reaktsiooni, see tähendab, et segu on ühtlaselt roosat värvi - see on O (I) veregrupp;

   kui tagasilöök andis ainult A (II) rühma seerumi ja seerum O (I) ja B (III) andsid positiivse reaktsiooni, see tähendab, et ilmusid terad - see on A (II) veregrupp;

   B(II) rühma seerum andis negatiivse reaktsiooni ning O(I) ja A(II) rühma seerumid positiivse reaktsiooni - see on B(III) veregrupp.

kõik 3 seerumit andsid positiivseid reaktsioone – testitud AB (IV) rühma veri. Sel juhul tehakse uuring AB (IV) rühma seerumiga.

Märge! Uuritud vere tilgad peaksid olema 5-10 korda väiksemad kui seerumi tilgad.

Isohemaglutinatsiooni vead.

Ei aglutineeri seal, kus see peaks olema, ja aglutineerub seal, kus see ei tohiks olla. See võib olla tingitud madalast seerumi tiitrist pluss kehvast erütrotsüütide aglutinatsioonist.

Aglutinatsiooni olemasolu seal, kus see ei tohiks olla- see on pseudoaglutinatsioon, kui erütrotsüütide kuhjad moodustavad "mündisambad". Taldriku kiikumine või soolalahuse lisamine hävitab need.

Panaglutinatsioon, kui seerum kleepub kokku kõik punased verelibled, sealhulgas oma veregrupp. 5. minutiks kaovad aglutinatsiooni tunnused.

Esineb ka nn külma panaglutinatsiooni, kui erütrotsüüdid kleepuvad kokku ruumi madala õhutemperatuuri (alla 15 °C) tõttu.

Kõigil neil juhtudel viiakse läbi kas korduv reaktsioon või vastavalt standardsetele erütrotsüütidele.

Vere Rh-kuuluvuse määramine

Rh-seotuse määramiseks, st Rh-süsteemi antigeenide olemasolu või puudumise tuvastamiseks inimeste veres, kasutatakse standardseid reesusvastaseid seerumeid (reagente), mis on spetsiifilisuselt erinevad, st sisaldavad antikehi. selle süsteemi erinevad antigeenid. Rh 0 (D) antigeeni määramiseks kasutatakse kõige sagedamini reesusvastast seerumit, millele on lisatud 10% želatiinilahust või standardset reesusvastast reaktiivi, mis on eelnevalt valmistatud 33% polüglütsiini lahusega. Uuringu täpsemate tulemuste saamiseks, aga ka teiste seroloogiliste süsteemide antigeenide tuvastamiseks kasutatakse Coombsi testi (see on ka väga tundlik ülekantava vere ühilduvuse määramisel). Uuringuks kasutatakse natiivset verd või mis on valmistatud mõne säilitusainega. Sel juhul tuleks veri säilitusainest maha pesta kümnekordse koguse isotoonilise naatriumkloriidi lahusega. Rh-kuuluvuse määramisel- Rh 0 (D) tuleks kasutada kahte seerumi või reesusvastase reagendi proovi kahest erinevast seeriast ja samal ajal kasutada standardseid erütrotsüüte, mis on saadud Rh-positiivse (Rh +) ja Rh-negatiivse (Rh -) verest verest. ) üksikisikud. Teiste isoantigeenide määramisel tuleks vastavalt kasutada kontrollerütrotsüüte, mis standardseerumis sisaldavad või puuduvad antigeenid, mille vastu antikehad on suunatud.

Mittetäielikud kuumaaglutiniinid on kõige levinum antikehade tüüp, mis võib põhjustada autoimmuunse hemolüütilise aneemia teket. Need antikehad kuuluvad IgG-le, harva - IgM-le, IgA-le.

COOMBSI TEST

Coombsi test: sissejuhatus. Coombsi test on hemaglutinatsioonireaktsioonil põhinev laboratoorne diagnostiline meetod.

Autoimmuunse hemolüütilise aneemia diagnoosimise peamine meetod on Coombsi test. See põhineb immunoglobuliinide (eriti IgG) või komplemendi komponentide (eriti C3) spetsiifiliste antikehade võimel aglutineerida IgG või C3-ga kaetud erütrotsüüte.

IgG ja C3b seondumist erütrotsüütidega täheldatakse autoimmuunse hemolüütilise aneemia ja ravimitest põhjustatud immuunhemolüütilise aneemia korral. Otsene Coombsi test. Otsest Coombsi testi kasutatakse punaste vereliblede pinnale fikseeritud antikehade või komplemendi komponentide tuvastamiseks. See viiakse läbi järgmiselt:

Inimese immunoglobuliinide (antiglobuliini seerum) või komplemendi (antikomplementaarne seerum) antikehade saamiseks immuniseeritakse looma inimese seerumi, immunoglobuliinide või inimese komplemendiga. Loomalt saadud seerum puhastatakse teiste valkude vastastest antikehadest.

Patsiendi erütrotsüüte pestakse soolalahusega, et täielikult eemaldada seerum, mis neutraliseerib immunoglobuliinide ja komplemendi vastased antikehad ning võib põhjustada valenegatiivse tulemuse.

Kui erütrotsüütide pinnale on fikseeritud antikehad või komplemendi komponendid, põhjustab antiglobuliini või antikomplementaarse seerumi lisamine erütrotsüütide aglutinatsiooni.

Otsest Coombsi testi kasutatakse järgmistel juhtudel:

autoimmuunne hemolüüs.

Vastsündinu hemolüütiline haigus.

Ravimitest põhjustatud immuunne hemolüütiline aneemia.

Hemolüütilised transfusioonireaktsioonid. Kaudne Coombsi test. Kaudne Coombsi test tuvastab erütrotsüütide vastased antikehad seerumis. Selleks inkubeeritakse patsiendi seerumit 0. rühma doonorerütrotsüütidega ning seejärel tehakse otsene Coombsi test.

Kaudset Coombsi testi kasutatakse järgmistel juhtudel:

Doonori ja retsipiendi vere individuaalse sobivuse määramine.

Alloantikehade, sealhulgas hemolüütilisi transfusioonireaktsioone põhjustavate antikehade tuvastamine.

Pinnapealsete erütrotsüütide antigeenide määramine meditsiinigeneetikas ja kohtumeditsiinis.

Identsete kaksikute kinnitamine luuüdi siirdamisel.

Bioloogilise testi läbiviimiseks kantakse veri üle nii kiiresti kui võimalik (eelistatavalt joaga). Pärast 25 ml vere ülekannet kinnitatakse süsteemi toru klambriga. Seejärel tehakse 3-minutiline paus, mille jooksul jälgitakse adressaadi seisundit. Bioloogilise proovi seadistamiseks süstitakse kolm korda 25 ml verd. Testi lõpus (pärast esimese 75 ml vere ülekannet 25 ml osaannustena 3-minutilise intervalliga) reguleeritakse süsteemi vajalik kiirus vereülekanded. Kui patsiendile antakse üle rohkem kui üks vereviaal, tuleb nõel veenist eemaldada. Sel juhul eemaldatakse nõel selle viaali katseklaasist, milles veri on välja jooksnud, ja sisestatakse järgmisse viaali. Süsteemi toru (kummist või plastikust) kinnitatakse sel hetkel klambriga. Kui vereülekande ajal tekib vajadus retsipiendile mõne muu ravimi intravenoosseks manustamiseks, tehakse seda süsteemi kummitoru läbistamisega. Plasttoru torked on vastuvõetamatud, kuna need ei kuku maha. Pärast iga vereülekannet tuleb patsienti jälgida, et tuvastada ja õigeaegselt kõrvaldada võimalikud tüsistused, kaasa arvatud allergilised reaktsioonid. Kehatemperatuuri tuleb mõõta 2 tundi pärast vereülekande lõppu. Selle suurenemisega tuleb mõõtmist korrata järgmise 4 tunni jooksul iga tunni järel. Sama oluline on urineerimise ja uriini koostise jälgimine, mis võimaldab tuvastada toksilise transfusioonijärgse reaktsiooni olemasolu. Oliguuria ja anuuria tekkimine pärast vereülekannet, vererakkude ja valkude esinemine uriinis on otsene märk vereülekandejärgse hemolüüsi tekkest.