Rpga או תגובת hemagglutination פסיבית איזה סוג של בדיקת דם זו. Diagnosticum erythrocyte Salmonella V-antigenic נוזל אבחון של מחלות זיהומיות אחרות

בדיקת דם שנערכה היטב מסייעת לאתר פתוגנים של מחלות מורכבות שונות בגוף כבר בשלבי התפתחותם המוקדמים, ולעיתים אף לפני הופעת התסמינים הקליניים של המחלה. לעתים קרובות מאוד, רופאים רושמים למטופלים ניתוח לתגובת צבירה. בהמשך נעסוק בעובדה שמדובר בבדיקת דם RPHA, מתי משתמשים בה ועל מה היא יכולה לספר?

עקרון הפעולה

תגובת ההמגלוטינציה העקיפה (הנקראת גם תגובת ההמגלוטינציה הפסיבית, הידועה גם כ-RPHA, RNHA) מתרחשת כאשר האריתרוציטים הסופחים את האנטיגן נחשפים לסרום חיסוני התואם לאנטיגן זה.

מחקרים הראו ששיטה זו עדיפה משמעותית על בדיקות סרולוגיות אחרות בספציפיות וברגישות. לכן, הוא משמש לעתים קרובות כדי לזהות מחלות הנגרמות על ידי חיידקים או rickettsiae. תמציות חיידקים, אנטיגנים מטוהרים של חיידקים שונים, רכיבים של חיסונים חיידקיים יכולים לשמש כאנטיגנים לניתוח כזה.

לאחר כניסת חיידק פתוגני לגוף האדם, מתחילים להיווצר בו נוגדנים ספציפיים ולא ספציפיים, היוצרים תגובה חיסונית מסוימת. במקרה של עגבת, הנחשבת נגרמת על ידי treponema pallidum, מיוצרים בדם אנושי ספירושטה גרם שלילי, נוגדנים לא טרפונמלים או טרפונמלים. מחקרי אבחון מעבדה מבוססים על איתור שלהם, אשר אמור לאשר או להפריך את נוכחותו של הגורם הסיבתי של הנגיף בגוף.

עם RPHA, אריתרוציטים, שעל פני השטח שלהם ספגו אנטיגנים של טרפונמה חיוורת, במקרה של הוספת סרום עם נוגדנים לטרפונמה מחומר של אדם נגוע בעגבת, נצמדים זה לזה, כלומר, מתרחשת הצבירה שלהם.

מהימנות המחקר

חשוב לזכור כי נוגדנים ל-palidum spirochete מתחילים להופיע בגוף של אנשים נגועים 2-4 שבועות לאחר ההדבקה, ובמקרים מסוימים ניתן להאריך תקופה זו עד 6 שבועות.

מסיבה זו, רגישות האנליזה ל-RPHA בשלב הראשוני של התפתחות המחלה היא כ-86%, וזה נחות משמעותית מהדיוק באבחון החולים בשני השלבים הבאים. רגישות הניתוח עבור חולים כאלה, כמו גם עבור נשאים של עגבת סמויה, מגיעה ל-99-100%.

עם זאת, לתגובה של המגלוטינציה פסיבית יש סגוליות גבוהה מאוד, המגיעה לרמה של 96-100%.

זה מאפשר להשתמש בבדיקה זו כדי לאשר את האבחנה במקרה של תגובה חיובית של מחקר ראשוני שאינו טרפונמלי, למשל, תגובה של מיקרו-משקעים של סרטן שלפוחית ​​השתן.

בהתחשב בכך שהרגישות של בדיקות טרפונמל, כולל TPHA, עולה באופן משמעותי על הרגישות של שיטות שאינן טרפונמל, בדיקות כאלה הפכו יותר ויותר לבדיקות סקר לאיתור עגבת. עם זאת, כאשר מתקבלת תגובת סקר חיובית, נדרשת ניתוח ספציפי נוסף (טרפונמל) להבהרת האבחנה, אך לא TPHA.

פענוח הניתוח

כאשר מוסיפים לריאגנט שבאמצעותו המחקר מתבצע סרום עם נוגדנים לטרפונמה מחומר של אדם נגוע בעגבת, מתרחשת אגלוטינציה של אריתרוציטים, וכתוצאה מכך הם משקעים.

מספר אריתרוציטים הנצמדים מושפע מרמת הנוגדנים בסרום. לכן, hemagglutination פסיבי לא רק מראה נוכחות של נוגדנים, אלא גם מאפשר לך להגדיר את מספרם. תוצאת המחקר מיוצגת על ידי רמת טיטר הנוגדנים.

תגובה חיובית מצביעה על נוכחות הפתוגן בגוף המטופל. עם זאת, במהלך תהליך האבחון עלולות להופיע תגובות חיוביות כוזבות, שמספרן סטטיסטית אינו עולה על רמה של 0.05-2.5% מסך המחקרים.

תגובה חיובית של TPHA אצל אנשים שאינם נגועים בעגבת עלולה להתרחש אם יש:

• מחלות רקמת חיבור מערכתיות,
• בדם של החולה נוגדנים לפתוגנים הדומים לטרפונמה חיוורת,
• פתולוגיות פיזיולוגיות, כגון אוטם שריר הלב,
• הפטיטיס B או C
• מחלות אונקולוגיות,
• טיפוס, לפטוספירוזיס, שחפת,
• זיהום ב-HIV
• אטיולוגיה של קרציות בורליוזיס,
• פציעות או שברים נרחבים,
• הֵרָיוֹן,
• במקרה של הזרקות סמים.

ברוב המקרים, תגובות חיוביות כוזבות מלוות בטיטר נמוך. טיטר גבוה אופייניים לשלב המשני של המחלה ולעגבת סמויה בעבר. עם זאת, הם יכולים להופיע גם עם תגובה חיובית כוזבת בחולים עם ניאופלזמה ממאירה.

אצל אנשים שחלו בעגבת לפחות פעם אחת, התגובה של RPHA נשארת חיובית עד סוף חייהם.

חריגים נדירים הם אותם מצבים שבהם המחלה התגלתה בשלב מוקדם של התפתחות, ולאחר מכן בוצע טיפול אינטנסיבי ויעיל. לכן, לא ניתן להשתמש בניתוח של TPHA כדי להעריך את הדינמיקה של החלמה או אבחון השוואתי של שלבים מוקדמים או מאוחרים של המחלה.

עם קבלת תגובה חיובית, יש צורך לבחון בני משפחה של החולה ואנשים שקיימו עמו מגע מיני.

ניתן לקבל תגובה שלילית במקרים הבאים:

• לאדם אין עגבת,
• דם שנלקח בצורה לא נכונה למחקר,
• 2-4 שבועות חלפו מאז ההדבקה, ועדיין לא החל ייצור הנוגדנים.

בכל מקרה, יש להעריך את תוצאת המחקר בשילוב עם אינדיקטורים מעבדתיים ואנמנסטיים נוספים.

למי מוצג הניתוח?

הרופא עשוי לכוון תרומת דם לחולי RPHA במקרים הבאים:

• בנוכחות ביטויים קליניים של עגבת: פריחות כיבית, בלוטות לימפה מוגדלות, התקרחות מפושטת ואחרים,
• אם אתה חושד בזיהום אפשרי במקרה של מגע עם אנשים שכבר חולים,
• תורמים שמוכנים לתרום דם,
• אנשים שעוברים בדיקות מניעה שנתיות או עורכים ספרים סניטריים,
• חולים עם בדיקת סקר חיובית,
• לפני הכניסה לבית חולים,
• במהלך הבדיקה הטרום ניתוחית
• לאיתור פתוגנים של סלמונלוזיס, דיפטריה, דיזנטריה בשיטת ביצוע RPHA עם האבחון המתאים.

הליך מחקר

דגימת דם ורידי המוגשת על ידי המטופל נשלחת לבדיקה. כדי לא להגיע למסקנה שגויה, על המטופל להיות אחראי להתכונן לניתוח. על מנת שתוצאות הבדיקה יהיו אמינות, יש לפעול לפי ההמלצות הבאות:

• הניתוח צריך להיעשות רק על בטן ריקה.
• ביום הניתוח ניתן לשתות מים מינרליים ללא גז בכמויות מינימליות.
• אין לעשן לפחות 30 דקות לפני הבדיקה, אך עדיף להגדיל את הזמן הזה למספר שעות.
• מוטל איסור ישיר על צריכת משקאות אלכוהוליים.
• מטופלים שצריכים להשתמש באופן קבוע בתרופות כלשהן צריכים בהחלט ליידע את הרופא המפנה על כך.
• אם אתם חשים ברע או חשים ברע, יש להודיע ​​לאחות שנוטלת את דגימת הדם או לרופא במרפאת החוץ שבה אתם צריכים לבצע את הבדיקה.

היו אחראיים לא רק לשאלה היכן לגשת למבחן, אלא גם להכנה לבחינה.

אבחון של מחלות זיהומיות אחרות

לא צריך לחשוב שמחקר כזה כמו RPGA יכול להתבצע רק כדי לזהות את הגורם הסיבתי של עגבת בגוף.

ניתוח עם אבחון סלמונלה מאפשר לזהות נוכחות של זיהום במערכת העיכול - סלמונלה. החל מהיום הרביעי לאחר ההדבקה, הגוף מייצר נוגדנים לאנטיגנים של סלמונלה, אותם ניתן לאתר בשיטת RPGA. תוצאה שלילית מצביעה על היעדר זיהום, וטיטר חיובי, העולה מ-1:200 ל-1:800 בשלב החריף, יצביע על נוכחותו.

שיטת ביצוע RPHA עם סמן דיפתריה מאפשרת אבחון דיפתריה והערכת חסינות לאחר חיסון. נוגדנים מתחילים להיווצר על ידי מערכת החיסון כבר למחרת לאחר ההדבקה, ונשארים בגוף למשך מספר שבועות. הרגישות של ניתוח זה עולה על שיטת המחקר הבקטריולוגית. טיטר 1:80 מאשר נוכחות של דיפתריה בגוף.

סמן הדיזנטריה ב-RPHA מזהה בצורה המדויקת ביותר שיגלוזיס (דיזנטריה בסילארית), גם בהשוואה לשיטת האבחון המעבדתית באמצעות תרבית חיידקים. אם החולה אינו מקבל טיפול איכותי, אז המחלה זורמת לתהליך כרוני, בו מתרחשות לעיתים קרובות הישנות. הניתוח מאפשר לאבחן את השלב החריף והכרוני של השלשול, לזהות את הגורם הגורם לדיזנטריה, להבחין בין שיגלוזיס חיידקי לסרטן המעי הגס, הפרעות אנדוקריניות או דלקת של המעי הגס. תגובה שלילית מצביעה על היעדר חיידק, ומאשרת את נוכחותו עם טיטר של 1:80 לתינוקות או 1:320 למבוגרים.

ביצוע מחקר עם סמן חצבת מאפשר לקבוע את המחלה עם חצבת. בדיקה כזו יכולה להוות חלופה לניתוח HI המבוצע לעתים קרובות לאבחון חצבת.

אז, בדיקת דם RPHA - מה זה? לסיכום, אנו יכולים לומר בבטחה כי זוהי שיטה מודרנית, רגישה ואמינה ביותר לאבחון מחלות שונות של אטיולוגיה בקטריולוגית.

בקשר עם

ערכת ריאגנטים Diagnosticum Salmonella VI-antigenic מיועדת לזיהוי בסרום דם אנושי של נוגדנים ספציפיים לאנטיגן V של סלמונלה טיפוס בתגובה של המאגלוטינציה פסיבית (RPHA).

1. תכונות הערכה

2.1. עקרון השיטה.

העיקרון הפעיל של Diagnosticum Salmonella VI-antigenic הוא אנטיגן V המקובע על פני השטח של אריתרוציטים. בעת אינטראקציה עם סרה המכילה נוגדנים לאנטיגן Vee, נצפית התופעה של צמיחת אריתרוציטים.

2.2. הרכב הסט

ריאגנטים	כַּמוּת
Diagnosticum erythrocytic Salmonella V-antigenic נוזל- מייצג תרחיף 1% של פורמלין ורגיש עם Vi-antigen Salmonella טיפוס אריתרוציטים של כבשים בתמיסת חיץ פוספט (pH 7.2 + 0.2; ריכוז 0.06 מול/ליטר). השעיה הומוגנית של צבע חום ללא פתיתים; בעת שקיעה נוצרות 2 שכבות: משקע חום צפוף של אריתרוציטים וסופרנטנט צהבהב שקוף	בקבוק אחד - 3 מ"ל
קולטן סלמונלה אבחנתי בסרום Vee יבש -מסה הומוגנית מלבן עם גוון חום ועד בז'	בקבוק אחד - מ-0.1 מ"ל
1% השעיה של אריתרוציטים כבשים רשמיים ולא רגישים- השעיה הומוגנית של צבע חום ללא פתיתים; בעת שקיעה נוצרות 2 שכבות: משקע חום צפוף של אריתרוציטים וסופרנטנט צהבהב שקוף	בקבוקון 1 -
תמיסה לדילול סרום והגדרת RPHA -תמיסת נתרן כלורי 0.9% היא נוזל צלול וחסר צבע, pH 6.5 עד 7.5	2 בקבוקים - 8 מ"ל כל אחד
צלחת תחתית עגולה לתגובות אימונולוגיות לשימוש חד פעמי -מורכב מ-8 שורות, שכל אחת מהן כוללת 12 חורים עם תחתית שקופה, חסרת צבע, עגולה	1 PC

1. מאפיינים אנליטיים ודיאגנוסטיים.

3.1. יש לאגד את דיאגנוסטיקום ב-RPHA עם סרום של קולטן אבחנתי סלמונלה B יבש בדילול של לפחות 1:160.

הרמה המותנית של מאפייני האבחון של סרום הדם של אנשים בריאים צריכה להיחשב כדילול של סרום שאינו גבוה מ-1:20.

3.2. זמן הניתוח הוא שעתיים.

3.3. הסט מיועד ל-8 הגדרות.

1. אמצעי זהירות

בעת עבודה עם הערכה, עליך לפעול לפי "כללי התכנון, אמצעי זהירות, תברואה תעשייתית, משטר אנטי-מגיפי והיגיינה אישית בעבודה במעבדות (מחלקות, מחלקות) של מוסדות סניטריים ואפידמיולוגיים של מערכת משרד החינוך. בריאות ברית המועצות (M., 1981).

יש להתייחס לסרום המנותח, כמו גם את הריאגנטים שבמגע איתם, כבעלי פוטנציאל זיהומי, המסוגלים לאחסן או להעביר לטווח ארוך של HIV, נגיף הפטיטיס או כל גורם אחר של זיהום ויראלי - יש לטפל בהם בזהירות :

• עבודה בכפפות גומי;
• בעת פיפטציה יש צורך להשתמש בפיפטות אוטומטיות;
• בסיום העבודה יש ​​לטפל בסרה המנותחת ובריאגנטים במגע איתם, המכשירים, בתמיסת חיטוי
• נגב את הציוד לפני ואחרי העבודה עם 70% אלכוהול אתילי.

יש להשבית את הסרום המנותח ב-56 0 C למשך 30 דקות.

הסרום האבחנתי הנספג לסלמונלה Vee dry inactivated כלול בערכה.

תוצאות ניתוח אובייקטיביות מובטחות בתנאים הבאים:

• אחסון כל הריאגנטים של הערכה צריך להתבצע בטמפרטורה של 2 עד 8 0 С;
• אין להשתמש בריאגנטים שפג תוקפם;
• אין להשתמש בריאגנטים של הערכה אם הם אינם מסומנים בהתאם על האריזה שלהם;
• עבור RPHA, השתמש בריאגנטים הכלולים רק בערכה זו.

מחיר: בבקשה

אתה יכול להוסיף פריט לעגלת הקניות שלך על ידי ציון הכמות

יַצרָן: Microgen NPO FSUE

מדינה:רוּסִיָה

יחידה מידה:מַעֲרֶכֶת

סוג אריזה:קופסת קרטון

קוד ספק:

תיאור

Diagnosticum erythrocyte salmonelosis Vi-antigenic מיועד לקביעת התגובה של hemagglutination פסיבי (RPHA) הוא השעיה של 0.75% של קבוצת דם אריתרוציטים אנושיים פורמלים ורגישים O (I) עם Vi-antigen בתמיסת חיץ פוספט (pH 7.2 ± 0.2; ריכוז - 0.06 מול/ליטר), נשמר עם פורמלין. שלם עם קולטן סלמונלה אבחנתי בסרום Vee, יבש, תמיסה לדילול וצלחת תחתית עגולה לתגובות אימונולוגיות לשימוש חד פעמי, 96 באר. עקרון הפעולה מבוסס על תופעת אגלוטינציה של אריתרוציטים בעת אינטראקציה עם סרה המכילה נוגדנים לאנטיגן V המקובע על פני השטח של אריתרוציטים. מיועד ל-8 הגדרות




מטרה פונקציונלית

זיהוי בדגימות סרום דם אנושי של נוגדנים ספציפיים לאנטיגן V של טיפוס סלמונלה. תגובת האגלוטינציה בדילול אינה נמוכה מ-1/2 מהטיטר שלהם, אך לא פחות מ-1:160. הרמה המותנית של סרום דם אבחנתי של אנשים בריאים צריכה להיחשב כדילול סרום לא גבוה מ-1:20. אין להצמיד את דיאגנוסטיקום על-ידי סלמונלה אבחנתית ספיגה יבשה ל-RA: קולטן O 9 - בדילול של 1:40 ומעלה, קולטן H d - בדילול של 1:10 ומעלה.
דילולים סדרתיים של הסרום המנותח מוכנים ב-0.05 מ"ל של תמיסת נתרן כלורי 0.9% המצורפת החל מ-1:10 עד 1:2560 וסדרה 1 של דילול סדרתי כפול של הסרום האבחוני, החל מדילול של 1:10, לטיטר כפול המצוין על תווית הבקבוק. נער את הבקבוקונים לפני הפתיחה ובמהלך הפעולה כדי להומוג את התרחיף. חפרו לתוך בארות הטבליה המצורפת, הוסיפו 0.025 מ"ל של אבחון. הגדר פקדים ודגירה בתרמוסטט. זמן הניתוח הוא שעתיים.
בקרות חובה הן: בקרת סרום אבחנתי סלמונלה נספג קולטן B סרום יבש מנותח (מדולל 1:10 בנפח של 0.05 מ"ל) ובדיקת היעדר אגלוטינציה ספונטנית של הדיאגנוסטיקום.
ההתחשבנות בתוצאות התגובה מתבצעת על פי מערכת ארבעת הצלבים:
4+ כל אריתרוציטים צמודים ומכסים באופן שווה את תחתית הבאר בצורה של "מטריה";
3+, כמעט כל אריתרוציטים צבועים, על רקע שלהם יש טבעת לא בולטת של אריתרוציטים מושבעים לא צמודים;
3+ יחד עם אגלוטינאט אחיד בתחתית החור יש משקעים של אריתרוציטים לא צמודים בצורת "טבעת" קטנה או "כפתור";
1+ רוב האריתרוציטים אינם צמודים ומתיישבים בצורה של "טבעת" קטנה עם קצוות חלקים או "כפתורים" במרכז תחתית הבאר.
(-) אין סימני צבירה. אריתרוציטים התיישבו בצורה של "רינגלט" קטן עם קצוות חלקים או כפתורים במרכז הבאר או בתחתית הצינור.
תגובה של לפחות 3+ נחשבת לחיובית.
התוצאות המתקבלות ב-RPHA יכולות להיחשב אמינות אם הסרום של הקולטן האבחנתי לסלמונלה B יבש 1:10 השיג תוצאה חיובית בדילול של לא פחות מ-14 מהטיטרים שלהם, וב-2 בארות עם הסרום המנותח ועם סרום של קולטן סלמונלה אבחנתי נספג B יבש בדילול 1:10 לא צריכים להיות פתיתים ומשקעים; בבארות עם תמיסת נתרן כלורי 0.9% ודיאגנוסטיקום - התגובה שלילית.
טיטר הנוגדנים של הסרום המנותח נחשב לדילול האחרון של הסרום, מה שעדיין נותן אגלוטינציה חיובית של אריתרוציטים.
אנשים שיש להם נוגדנים לאנטיגן V בדילול של 1:40 ומעלה נחשבים חשודים לנשא חיידקי טיפוס כרוני. עם זאת, בשל העובדה שלא ניתן לבצע את האבחנה רק על בסיס מחקר סרולוגי, יש צורך בבדיקה בקטריולוגית מעמיקה.

מפרטים

הרכב סט:
1. Diagnosicum erythrocyte salmonella V-antigenic, השעיה הומוגנית בצבע חום ללא פתיתים, שתי שכבות נוצרות במהלך השקיעה - משקע חום צפוף של אריתרוציטים וסופרנטנט צהבהב שקוף; 6 מ"ל - בקבוקון אחד;
2. סרום אבחנתי סלמונלה נספג קולטן Vee, מסה הומוגנית יבשה מלבן עם גוון חום עד בז' - בצורה של lyophilisate מ 0.1 מ"ל 1 בקבוק;
3. תרחיף 1% של אריתרוציטים כבשים רשמיים ולא רגישים - תרחיף חום הומוגני ללא פתיתים, שתי שכבות נוצרות עם שקיעה - משקע חום צפוף של אריתרוציטים וסופרנטנט צהבהב שקוף; 1 מ"ל - בקבוקון אחד;
4. תמיסה לדילול סרום ו-RPHA - תמיסה 0.9% נתרן כלורי - נוזל צלול חסר צבע - 8 מ"ל 2 בקבוקים;
5. הטבליה לתגובות אימונולוגיות לשימוש חד פעמי מורכבת מ-8 שורות, כל אחת עם 12 בארות עם תחתית עגולה וחסרת צבע שקופה - 1 pc.
תנאי אחסון: בחדר יבש וחשוך בטמפרטורה של +4...8°C. ניתן לאחסן בקבוקון פתוח עם אבחנה בצורה סגורה בטמפרטורה של 2 עד 8 מעלות צלזיוס למשך חודש אחד.
חיי מדף - 18 חודשים מתאריך הייצור, המצוין על האריזה.
רשום ב-Roszdravnazor

ההתחלה הפעילה של האבחון היא אנטיגן V הקבוע על פני השטח של אריתרוציטים. בעת אינטראקציה עם סרה המכילה נוגדנים לאנטיגן Vee, נצפית התופעה של צמיחת אריתרוציטים.

טופס שחרור

מיוצר בסט 1 בקבוק עם דיאגנוסטיקום - 3 מ"ל, קולטן סלמונלה אבחנתי נספג Vee Dry בצורת lyophilisate מ-0.1 מ"ל 1 בקבוק; תמיסת נתרן כלורי 0.9% - 2 בקבוקים של 8 מ"ל; טבליה לתגובות אימונולוגיות לשימוש חד פעמי - 1 pc.

מתחם

כמות ריאגנטים:

Diagnosticum erythrocyte salmonella V-antigenic, שהוא תרחיף של 0.75% של אריתרוציטים אנושיים O (I) מפורמלים ורגישים עם V-antigen מקבוצת הדם בתמיסת חיץ פוספט (pH-7.2 ± 0.2; ריכוז - 0.06 מול/ליטר) . חומר משמר - פורמלין. השעיה הומוגנית של צבע חום ללא פתיתים; בעת השקיעה נוצרות 2 שכבות: משקע חום צפוף של אריתרוציטים ונוזל סופרנטנט צהבהב שקוף 1 בקבוקון-3 מ"ל.

קולטן סלמונלה אבחנתי בסרום Vee dry - מסה הומוגנית מלבן עם גוון חום עד בז'. בקבוק אחד - מ-0.1 מ"ל.

תמיסת תחזוקה - תמיסת נתרן כלורי 0.9% - נוזל צלול וחסר צבע, pH 6.5 עד 7.5. 2 בקבוקים - 8 מ"ל.

פלטה תחתונה עגולה לשימוש חד פעמי לתגובות אימונולוגיות - מורכבת מ-8 שורות שכל אחת מהן כוללת 12 בארות עם תחתית שקופה, חסרת צבע ועגולה. 1 PC.

יש להצמיד את דיאגנוסטיקום ב-RPHA עם סרום של קולטן אבחנתי סלמונלה B יבש בדילול לא נמוך מ-1/2 מהטיטר שלהם, אך לא פחות מ-1/160. אין להצמיד את דיאגנוסטיקום על-ידי סלמונלה אבחנתית ספיגה יבשה ל-RA: קולטן O 9 - בדילול של 1:40 ומעלה, קולטן H d - בדילול של 1:10 ומעלה.


אינדיקציות לשימוש

נועד לזהות בדם אנושי נוגדנים ספציפיים לאנטיגן V של סלמונלה טיפוס בתגובה של המאגלוטינציה פסיבית (RPHA).

משטר המינון ושיטת היישום

דגימות סרום דם אנושי משמשות כדגימות מנותחות.
הדגימה המנותחת מאוחסנת בתנאים המונעים צמיחת חיידקים בטמפרטורה של 2 עד 8 מעלות צלזיוס למשך לא יותר מ-72 שעות. הקפאה מותרת, יש להפשיר דגימות מנותחות קפואות בטמפרטורת החדר לפני הבדיקה.
אסור לבצע ניתוח של דגימות עם המוליזה חמורה, גידול חיידקים, כמו גם של דגימות המאוחסנות לאורך זמן ללא הקפאה או הקפאה מחדש.

אָנָלִיזָה
הכנת פתרונות ל-RPHA.
יבש בקבוקונים פתוחים עם סרום של קולטן סלמונלה אבחנתי נספג V והוסף 1 מ"ל מתמיסת נתרן כלורי 0.9% המצורפת, ובכך לקבל דילול של 1:10, שהוא דילול עבודה.
בקבוקון פתוח עם סרום של קולטן סלמונלה אבחנתי נספג V יבש בדילול של 1:10 בצורה סגורה ניתן לאחסן בטמפרטורה של 2 עד 8 מעלות צלזיוס למשך חודש אחד.
Diagnosticum מוכן לשימוש. לפני פתיחת הבקבוקון עם הדיאגנוסטיקום, נער בעדינות עד לקבלת תרחיף הומוגני. מומלץ לחזור על ניעור במהלך הפעולה.
ניתן לאחסן בקבוקון פתוח עם אבחנה בצורה סגורה בטמפרטורה של 2 עד 8 מעלות צלזיוס למשך חודש אחד.
תמיסה של 0.9% נתרן כלורי. מוכן לשימוש.

ביצוע RPHA.
כאשר שולטים במספר כלשהו של סרומים מנותחים, חובה להגדיר את השורה הראשונה של האגלוטינציה עם סרום של קולטן B אבחנתי סלמונלה נספג.
לייצור RPHA משתמשים בטבליה לתגובות אימונולוגיות של שימוש חד פעמי. דילולים סדרתיים של הסרום המנותח מוכנים ב-0.05 מ"ל של תמיסת 0.9% נתרן כלוריד שסופקה החל מ-1:10 עד 1:2560 וסדרה 1 של דילול סדרתי כפול של הסרום של הקולטן האבחנתי לסלמונלה, Wi. יבש, החל מדילול של 1:10, עד פי שניים מהטיטר המצוין על התווית של הבקבוקונים של הסרום הזה.
0.025 מ"ל של דיאגנוסטיקום מתווסף לכל אחת מהבארות עם דילול בסרום.

בקרות חובה הן:
1. בקרת סרום של קולטן סלמונלה אבחנתי
סרום יבש מנותח, אשר בדילול של 1:10 בנפח של 0.05 מ"ל תורם
בשתי בארות בקרה.
2. בדיקת היעדר אגלוטינציה ספונטנית של הדיאגנוסטיקום, עבורה מוסיפים 0.025 מ"ל מהאבחון לשתי בארות המכילות 0.05 מ"ל של תמיסת נתרן כלורי 0.9%.
הטאבלט מנער ומניחים למשך 1.5-2.0 שעות בתרמוסטט בטמפרטורה של (37+1) מעלות צלזיוס.

חשבונאות לתוצאות
התגובה נלקחת בחשבון על פי מערכת ארבעת הצלבים:
4+ - כל אריתרוציטים צמודים ומכסים באופן שווה את תחתית החור;
3+ - כמעט כל אריתרוציטים צמודים. על הרקע שלהם יש טבעת לא בולטת של אריתרוציטים מושבעים לא צמודים;
3+ - יחד עם אגלוטינאט אחיד בתחתית החור יש משקעים של אריתרוציטים לא צמודים בצורה של "טבעת" או "כפתור" קטנה;
1+ - רוב האריתרוציטים אינם צמודים ומתיישבים בצורת "טבעת" קטנה עם קצוות חלקים או "כפתורים" במרכז תחתית החור.
(-) - אין סימני צבירה. אריתרוציטים התיישבו בצורה של "רינגלט" קטן עם קצוות חלקים או כפתורים במרכז הבאר או בתחתית הצינור.
תגובה של לפחות 3+ נחשבת לחיובית.
התוצאות המתקבלות ב-RPHA יכולות להיחשב אמינות אם הסרום של הקולטן האבחנתי לסלמונלה B יבש 1:10 השיג תוצאה חיובית בדילול של לא פחות מ-14 מהטיטרים שלהם, וב-2 בארות עם הסרום המנותח ועם סרום של קולטן סלמונלה אבחנתי נספג B יבש בדילול 1:10 לא צריכים להיות פתיתים ומשקעים; בבארות עם תמיסת נתרן כלורי 0.9% ודיאגנוסטיקום - התגובה שלילית.
טיטר הנוגדנים של הסרום המנותח נחשב לדילול האחרון של הסרום, מה שעדיין נותן אגלוטינציה חיובית של אריתרוציטים.
פרשנות של תוצאות.
אנשים שיש להם נוגדנים לאנטיגן V בדילול של 1:40 ומעלה נחשבים חשודים לנשא חיידקי טיפוס כרוני. עם זאת, בשל העובדה שלא ניתן לבצע את האבחנה רק על בסיס מחקר סרולוגי, יש צורך בבדיקה בקטריולוגית מעמיקה.

אמצעי זהירות לשימוש

סרום אבחנתי קולטן סלמונלה נספח Vee הכלול בערכה אינו פעיל יבש.
יש להשבית את הסרה לניתוח ב-56 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
הסרה שיש לנתח, כמו גם הריאגנטים, הציוד והמכשירים במגע איתם, עלולים להיות חומר זיהומי וצריך לטפל בהם בזהירות:
- עבודה בכפפות גומי;
- בעת פיפטציה יש צורך להשתמש במכשירים אוטומטיים;
- בסיום העבודה יש ​​לטפל בסרה המנותחת ובריאגנטים במגע איתם, המכשירים, בתמיסת חיטוי;
- נגב את הציוד לפני ואחרי העבודה עם אלכוהול אתילי 96%.

תוצאות ניתוח אובייקטיביות מובטחות בתנאים הבאים:
- אחסון כל הריאגנטים של הערכה צריך להתבצע בטמפרטורה של 2 עד 8 מעלות צלזיוס;
- אין להשתמש בריאגנטים שפג תוקפם;
- אין להשתמש בריאגנטים של הערכה אם אין סימון מתאים על האריזה שלהם;
- עבור RPHA השתמש בריאגנטים הכלולים בערכה זו בלבד.

תעודת רישום מס' RZN 2016/3905 מיום 04.04.2016

מַטָרָה

ערכת הריאגנטים "Diagnosticum erythrocyte Salmonella Vi-antigenic for RPHA" (SED-Vi) נועדה לזהות נוגדנים ל-Vi-antigen של הגורם הגורם לקדחת הטיפוס בדם אנושי על ידי בדיקת ההמגלוטינציה הפסיבית (RPHA).

הגדר מאפיין

עקרון הפעולה

בנוכחות נוגדנים לגורם הסיבתי של קדחת טיפוס, נצפית המגלוטינציה של אריתרוציטים של עוף עם רגישות ל-Vi-antigen, מה שמוביל להיווצרות "מטריה" של אריתרוציטים מיושב בתחתית בארות בצורת U של הצלחת. . בהיעדר נוגדנים לגורם הסיבתי של קדחת הטיפוס, האריתרוציטים המיושבים יוצרים "נקודה".

קבע הרכב

שם מגיב	תיאור	כמות בסט
Diagnosticum אריתרוציט Salmonella Vi-antigenic, יבש 6% (SED)	אריתרוציטים עוף מפורמלים שעברו רגישות לאנטיגן S.typhi Vi. מסה היגרוסקופית יבשה של צבע חום. לאחר פירוק - השעיה של צבע אדום-חום.	בקבוקון אחד, מ-0.6 מ"ל
סלמונלה אבחנתית נספג בסרום, קולטן Vi, יבש (מדולל 1:20, (K+))	סרום ארנב נספג סלמונלה, קולטן Vi, מדולל 1:20. מסה נקבובית היגרוסקופית יבשה בצבע לבן. לאחר ההמסה, זהו נוזל צלול צהבהב או חסר צבע.	בקבוקון 1, מ-0.3 מ"ל
חומר דילול לדוגמא (RID)	נוזל כחול-סגול שקוף.	בקבוקון 1, 10 מ"ל
תמיסת חיץ פוספט (PBS)	נוזל שקוף חסר צבע.	בקבוקון 1, 10 מ"ל
צלחת פולימר לשימוש חד פעמי לתגובות אימונולוגיות	פלטת פולימר חד פעמית לתגובות אימונולוגיות עשויה פוליסטירן שקוף חסר צבע.	1 PC.

מאפיינים אבחונים

יש לאגד את דיאגנוסטיקום ב-RPHA עם סרום אבחנתי נספג סלמונלה, קולטן Vi, יבש (בדילול של 1:20), עד לטיטר המצוין על תווית הסרום. הרמה המותנית של מאפייני האבחון של סרום הדם של אנשים בריאים צריכה להיחשב כדילול של סרום שאינו גבוה מ-1:20. זמן הניתוח הוא 3040 דקות. הערכה מיועדת לחקר 42 סרחי דם באפשרות ההקרנה או 10 סרחי דם באופציה של טיטרציה.

אמצעי זהירות

הערכה מיועדת לאבחון מבחנה בלבד. החומרים הכלולים ברכיבי הערכה אינם פעילים ובטוחים. בעת עבודה עם הערכה, יש להקפיד על SP 1.3.2322-08 ו-SanPiN 2.1.7.2790-10.

ציוד וחומרים נוספים

ציוד, חומרים, פתרונות:

• מכשירי פיפטה 1-ערוץ עם נפח מינון משתנה 5-40 μl; 40 - 200 μl; 200 - 1000 μl ו-1000 - 5000 μl;
• מכשירי פיפטה 8 או 12 ערוצים עם נפח מינון משתנה 5-40 μl ו-40-200 μl;
• מים מזוקקים (GOST 6709-72).

ניתוח דגימות

דגימות סרום הדם שנחקרו מאוחסנות בטמפרטורה של 2 עד 8 מעלות צלזיוס למשך לא יותר מ-3 ימים מרגע דגימת הדם. מותר לאחסן מי גבינה במצב קפוא בטמפרטורה שאינה עולה על מינוס 18 מעלות צלזיוס למשך לא יותר משנה. לפני השימוש, הדגימות מופשרות בטמפרטורה של 16 עד 25 מעלות צלזיוס ומערבבים בניעור. אסור להקפיא מחדש. אין להשתמש בדגימות עם גידול חיידקים והמוליזה. לפני הגדרת התגובה, סרום הבדיקה מחומם ב-56 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.

ביצוע ניתוח

הכנת סרום אבחון בקרה (K+)

הכן תמיסת עבודה של סרום נספג סלמונלה אבחנתי, קולטן Vi, יבש (מדולל 1:20) מ-0.3 מ"ל (K+). לשם כך, 0.3 מ"ל של תמיסת חיץ פוספט (PBS) מתווסף לתוכן הבקבוקון עם K+. ניתן לחלק את כמות הסרום הנותרת ולאחסן בהקפאה בטמפרטורה שאינה עולה על מינוס 18 מעלות צלזיוס למשך לא יותר מ-6 חודשים.

הכנת אבחון לסלמונלה אריתרוציטים (SED)

כדי להכין דילול עבודה של תרחיף סלמונלה אריתרוציט diagnosticum, מוסיפים 0.6 מ"ל מים מזוקקים לתכולת הבקבוקון עם 6% SED יבש ומניחים להידרציה למשך שעתיים בטמפרטורה של 16 עד 25 מעלות צלזיוס. לאחר מכן מוסיפים לתמיסה 2.4 מ"ל של תמיסת חיץ פוספט (PBS). תמיסת העבודה מאוחסנת בטמפרטורה של 2 עד 8 מעלות צלזיוס למשך לא יותר מחודש אחד. אסור להקפיא.

הצהרת RPHA במהלך בדיקת סרום הדם

סרת ההקרנה מדוללת בבארות הצלחת באופן הבא:

• דילולים ראשוניים של 1:20 מוכנים בבארות הראשונות של הטבליה, תחילה מוסיפים להם 190 μl של תמיסת RIP, ולאחר מכן 10 μl של הסרה הנחקרת. כל סרום מתווסף עם קצה נפרד ומופיע בקפידה (במקרה זה, צבע התמיסה בבארות צריך להשתנות מכחול-סגול לירוק לאחר הוספת הסרה);
• דילול סקר של 1:40 מוכנים בבארות השניות, תחילה מכניסים 25 μl של תמיסת PBS לתוכם, ולאחר מכן 25 μl של סרה מדוללת מראש ופיפטציה בזהירות.

עם כל הגדרה של RPHA, יש צורך לבצע קביעת בקרה של K + titer. לשם כך, 50 μl של תמיסת PBS מתווספים ל-8 בארות בשורה ארוכה. לאחר מכן, 50 μl של תמיסת עבודה K+ (1:20) מתווספת לבאר הראשונה, מובלת בקפידה ומועברת לבארות הבאות, 50 μl כל אחת, מקבלת דילול פי 2 מ- 1:40 עד 1:5120. בעוד 4 בארות, 50 μl של תמיסת PBS מתווסף כדי לשלוט ב-SED על היעדר hemagglutination ספונטני.

לתוך כל בארות הטבליה עם דילול סקר של הסרה הנחקרת (פרט לראשון המכיל RIP) והבקרות, הוסף 25 μl של SED. מערבבים את תרחיף SED בבקבוק או באמבטיה לפני השימוש!הטבליה מנערת ביסודיות ומשאירה אותה בטמפרטורה של 16 עד 25 מעלות צלזיוס למשך 30 עד 40 דקות עד לשקיעה מלאה של אריתרוציטים בבקרה.

הצהרת RPHA במהלך טיטרציה של סרום הדם הנחקר

טיטרציה של הסרה הנחקר ופתרון העבודה K+ מתבצע בשורות קצרות של הצלחת. שורה קצרה נוספת משמשת לשליטה בהיעדר המגלוטינציה ספונטנית של ה-EDS.

בבארות הראשונות של שורות קצרות לטיטרציה של סרום הבדיקה, מוסיפים 180 μl של תמיסת RIP. כל שאר הבארות מלאות ב-50 μl של תמיסת PBS.

20 μl של סרה הבדיקה מתווספים לבארות עם תמיסת RIP (מתקבל דילול 1:10). כל סרום מתווסף עם קצהו ומטפטף בזהירות (צבע התמיסה בבארות אמור להשתנות מכחול-סגול לירוק). לאחר מכן, 50 μl מועברים מהבארות הראשונות לבארות הבאות של השורות, תוך קבלת דילולים פי שניים מ- 1:20 עד 1:1280. בסוף הטיטרציה, 50 μl של פתרונות מוסרים מהבארות האחרונות.

עם כל הגדרה של RPHA, יש צורך לבצע קביעת בקרה של K + titer. לשם כך, 50 μl של תמיסת PBS מתווספים ל-8 בארות בשורה ארוכה. לאחר מכן, 50 μl של תמיסת עבודה K+ (1:20) מתווספת לבאר הראשונה, מובלת בקפידה ומועברת לבארות הבאות, 50 μl כל אחת, מקבלת דילול פי 2 מ- 1:40 עד 1:5120.

כדי לשלוט על האבחון על היעדר hemagglutination ספונטני, 50 μl של תמיסת PBS מתווספים לכל בארות של שורה קצרה.

בכל הבארות (למעט הבארות הראשונות של כל שורה עבור הסרה הנחקרת המכילה RIP) הוסף 25 μl של SED. מערבבים את תרחיף SED בבקבוק או באמבטיה לפני השימוש! הטבליה מנערת ביסודיות ומשאירה אותה בטמפרטורה של 16 עד 25 מעלות צלזיוס למשך 30 - 40 דקות עד לשקיעה מלאה של אריתרוציטים בבקרה.

חשבונאות ופרשנות תוצאות

התחשבנות בתוצאות בהקרנה של סרום דם

ההתחשבנות בתוצאות מתבצעת בסולם מותנה של ארבעה הצלבות. טיטר הסרום הוא הדילול שלו, שנותן hemagglutination על ידי לפחות 3 (+++) הצלבות.

• ++++ (4+) - אריתרוציטים צמודים יוצרים "מטריה" הפוכה בתחתית החור, קצוותיו נושרים;
• +++ (3+) - אריתרוציטים צמודים יוצרים "מטריה" הפוכה בתחתית החור, הקצוות שלו אחידים;
• ++ (2+) - יחד עם אריתרוציטים מצטברים, יש בתחתית החור משקעים בצורת "טבעת" קטנה של אריתרוציטים לא צמודים;
• + (1+) - רוב האריתרוציטים אינם צמודים ומתיישבים בצורה של "טבעת" קטנה;
• (-) - אריתרוציטים לא צמודים יוצרים "נקודה" בתחתית הבאר.

תוצאה חיובית נחשבת להמגלוטינציה של אריתרוציטים עמוסים ב-Vi-antigen ב-3 הצלבות לפחות (+++).

בקרת האיכות של הדיאגנוסטיקום היא 4 בארות של שורת הבקרה, שבהן נוספו רק תמיסת PBS ו-SED. לא אמורה להיות המגלוטינציה ספונטנית בבארות אלו - התגובה היא שלילית (-). אחרת, יש לחזור על המחקר. אם המגלוטינציה מופיעה במהלך שלב מחדש, אזי התרופה אינה בשימוש.

יש להתייחס לסרה עם תוצאה שלילית כמי שאינה מכילה נוגדנים לאנטיגן Vi בטיטר אבחנתי של 1:40 ומטה.

סרומים שנותנים תוצאה חיובית בדילול של 1:40 יש לבחון מחדש בגרסה עם טיטרציה בסרום לביסוס הטיטר שלו.

התחשבות בתוצאות בעת טיטרציה של סרת דם

טיטר הסרום הוא הדילול שלו, שנותן hemagglutination על ידי לפחות 3 (+++) הצלבות.

בקרת האיכות של האבחון היא בארות השורה לבקרת SED. לא אמורה להיות המאגלוטינציה ספונטנית בבארות אלו - התגובה היא שלילית (-). אחרת, יש לחזור על המחקר. אם המגלוטינציה מופיעה במהלך שלב מחדש, אזי התרופה אינה בשימוש.