Kvantitatívne stanovenie tanínov v dubovej kôre. Kvalitatívna analýza

Taníny sú komplexné vysokomolekulárne prírodné rastlinné fenolové zlúčeniny, ktoré sú schopné vyzrážať bielkoviny a alkaloidy a opaľovať surovú zvieraciu kožu a premieňať ju na trvácny produkt odolný voči hnilobe – kožu.

Pojem „taníny“ zaviedol v roku 1796 francúzsky vedec P. Seguin.

Taníny, alebo taníny, sú synonymom pre výraz „taníny“. Pochádza z latinsko-keltského označenia pre dub – „tan“ – a je široko používaný vo vedeckej literatúre.

Schopnosť týchto látok „opaľovať“ proteíny zvieracích koží, robiť ich nepriepustnými pre vodu a odolnými voči mikrobiálnemu rozkladu je založená na ich schopnosti interagovať s kolagénom, čo vedie k tvorbe stabilných polymérnych štruktúr. Činenie je zložitý fyzikálny a chemický proces spojený s tvorbou vodíkových, kovalentných a elektrovalentných väzieb medzi molekulami kolagénu a fenolovými skupinami tanínov.

Len polynukleárne fenoly obsahujúce viac ako jednu OH skupinu majú triesloviny. Ide o veľké fenolové molekuly s molekulovou hmotnosťou od 300 do 500 a niekedy až do 20 000. Mononukleárne fenoly a neobsahujúce početné OH skupiny sú len adsorbované na proteínoch, ale nemôžu vytvárať krížové väzby medzi sebou a proteínovými skupinami, „crosslink“ monomérny proteín skupiny. Do určitej miery inaktivujú enzymatické proteíny, ale nespôsobujú spojenie fenol-proteín v kolagéne, hlavnej proteínovej zložke kože. Preto majú fenoly s nízkou molekulovou hmotnosťou len sťahujúcu chuť, nazývajú sa aj potravinárske (čajové) taníny.

Klasifikácia

Prvý pokus o klasifikáciu trieslovín urobil švédsky chemik I. Berzelius, ktorý tieto látky rozdelil do dvoch skupín podľa ich schopnosti vytvárať čierne zlúčeniny zelenkastého alebo modrastého odtieňa so soľami Fe (III). Následne táto jednoduchá klasifikácia tanínov vytvorila základ presnejšej vedeckej klasifikácie, ktorú navrhol K. Freudenberg-
hom. Taníny začal deliť v závislosti od ich schopnosti hydrolyzovať pôsobením kyselín (alebo enzýmov) do dvoch skupín:

1) hydrolyzovateľné taníny:

gallotaníny;

ellagitaníny;

Depsidy alebo necukrové estery karboxylových kyselín;

2) nehydrolyzovateľné (kondenzované) taníny alebo flobafény, ktoré sa ďalej delia na deriváty:

katechíny (flavan-3-oly);

leukoantokyanidíny (flavan-3,4-dioly);

hydrostilbény.

hydrolyzovateľné taníny. Gallotaníny sú estery hexóz (zvyčajne D-glukózy) a kyseliny galovej. V glukóze je päť OH skupín, vďaka ktorým sa môžu vytvárať mono-, di-, tri-, tetra-, penta- a polygalloylétery. Zástupcom skupiny polygalloyléterov je čínsky tanín, ktorý sa získava z listov a na nich vytvorených výrastkov (hálky) škumpy polokrídlej (Rhus semialata Murr.). Reprezentantom polygalloyléterov je P-D-glukogallín izolovaný z koreňa rebarbory ​​a listov eukalyptu.

Ellagotaníny sú estery D-glukózy a kyseliny hexadifenolovej, hebulovej a iných, ktoré vznikajú spolu s kyselinou ellagovou. Elagotaníny sa nachádzajú v kôre z granátového jablka, v šupke vlašských orechov, v dubovej kôre a v semenákoch jelše. Rastliny zvyčajne neobsahujú kyselinu ellagovú, ale kyselinu hexahydroxydifénovú.

Pri kyslej hydrolýze tanínov sa táto kyselina mení na dilaktón – kyselinu elagovú.

Depsidy sú estery kyseliny galovej s kyselinou chinovou, chlorogénovou, kávovou, hydroxyškoricovou a flavanmi. Estery kyseliny galovej a katechíny sa nachádzajú v čajových listoch. Theogallin bol izolovaný z listov zeleného čaju.

Theogallin (depsid)

Prevažne hydrolyzovateľné triesloviny obsahujú také LR ako garbiarstvo, škumpa garbiarsky, hadovica horská, bergénia hrubolistá, horec officinalis, jelša čierna a o. sivá.

Prevažne kondenzované triesloviny obsahujú dub obyčajný, škorica vzpriamená, čučoriedka obyčajná, čerešňa vtáčia.

Nehydrolyzovateľné taníny. Sú to oligoméry a polyméry katechínov, leukoantokyanidínov a hydroxystilbénu, kde sú jednotky navzájom spojené silnými väzbami uhlík-uhlík v polohách C2-C6, C2-C8, C4-C8, C5-C2. Navyše nikdy neobsahujú zvyšky cukru.

Pri tvorbe kondenzovaných tanínov sa pyránový kruh katechínu (leukoantokyanidínu) poruší a atóm C2 je spojený väzbou C–C s atómom C6 inej molekuly katechínu (leukoantokyanidín). Kondenzované taníny sa pôsobením kyselín nerozkladajú; naopak, majú tendenciu prechádzať z oligomérov na dlhšie polyméry (kyslá polymerizácia) za vzniku amorfných, často do červena sfarbených zlúčenín – flobafénu. K tvorbe kondenzovaných tanínov dochádza v živej rastline v procese biosyntézy a po jej smrti - pri technologickom spracovaní dreva.

Tvorba kondenzovaných tanínov z monomérov

Fyziochemické vlastnosti

Podľa fyzikálno-chemických vlastností sú taníny amorfné zlúčeniny žltkastej alebo hnedej farby.

Prírodné taníny majú priemernú molekulovú hmotnosť 500-5000, ale jednotlivé zlúčeniny - až 20 000. Pri zahriatí na 180-200 ° C sa triesloviny (bez topenia) zuhoľnatejú, pričom sa uvoľňuje pyrogalol alebo pyrokatechol. Rozpúšťajú sa v mnohých organických rozpúšťadlách (acetón, etanol, etylacetát, pyridín), nie však v chloroforme, petroléteri, benzéne. Tiež dobre rozpustný vo vode, najlepšie horúcej. Po rozpustení vo vode dávajú koloidné roztoky slabo kyslej reakcie. So soľami ťažkých kovov tvoria farebné komplexy. Zrážané roztokmi aminokyselín, bielkovín, alkaloidov. Mnohé triesloviny sú opticky aktívne zlúčeniny. Majú adstringentnú chuť. Ľahko oxiduje na vzduchu, získava červenohnedú farbu, niekedy tmavohnedú. Prítomnosť hydroxidov alkalických kovov značne urýchľuje oxidáciu tanínov. Hydrolyzovateľné taníny sa pôsobením kyselín alebo enzýmov rozkladajú na organické kyseliny a glukózu.

Izolácia od VRS

Taníny sú zmesou rôznych polyfenolov so zložitou štruktúrou, veľmi labilné, preto je izolácia a analýza jednotlivých zložiek tanínov veľmi náročná. Na získanie množstva tanínov sa rastlinné suroviny extrahujú horúcou vodou, ochladia sa a potom sa extrakt spracuje postupne:

1) petroléter alebo benzén (na čistenie od chlorofylu, terpenoidov, lipidov);

2) dietyléter, ktorý extrahuje katechíny, kyseliny hydroxyškoricové a iné fenolové zlúčeniny;

3) etylacetát, do ktorého prechádzajú leukoantokyanidíny, estery kyseliny hydroxyškoricovej atď.

Zvyšný vodný extrakt s tanínmi a inými fenolickými zlúčeninami a frakcie 2 a 3 (dietyléter a etylacetát) sa rozdelí na jednotlivé zložky pomocou rôznych typov chromatografie. Použitie:

Adsorpčná chromatografia na kolónach celulózy, polyamidu (niekedy sa namiesto polyamidu používa gole prášok);

Deliaca chromatografia na silikagélových kolónach;

iónomeničová chromatografia;

Gélová filtrácia na kolónach Sephadex atď.

Identifikácia jednotlivých tanínov je založená na porovnaní Rf v chromatografických metódach (na papieri, v tenkej vrstve sorbentu), spektrálnych štúdiách, kvalitatívnych reakciách a štúdiu produktov štiepenia (u hydrolyzovateľných tanínov).

Kvalitatívna extrakcia tanínov

Kvalitatívne reakcie na stanovenie tanínov možno rozdeliť do dvoch skupín:

1) všeobecný (depozícia) - na zistenie prítomnosti tanínov;

2) skupina (farba) - na určenie príslušnosti tanínov k určitej skupine.

Najprv sa na uskutočnenie kvalitatívnych reakcií pripraví vodná extrakcia tanínov z VP.

Taníny sa zisťujú pomocou nasledujúcich reakcií:

Spojenie s 1% roztokom želatíny v 10% roztoku NaCl. Objaví sa zákal, ktorý zmizne, keď sa pridá nadbytok želatíny. Reakcia je špecifická;

Zrážanie so soľami alkaloidov (napríklad chinínsulfát). Vytvorí sa biela zrazenina;

Spojenie s 5 % roztokom dvojchrómanu draselného (K2Cr2O7). Vytvorí sa hnedá zrazenina alebo zákal. Rovnaká reakcia sa používa aj ako histochemická reakcia na detekciu lokalizácie tanínov vo VP;

Spojenie s roztokom zásaditého octanu olovnatého: vytvorí sa biela zrazenina;

V kombinácii s vanilínom (v prítomnosti 70% sírovej alebo koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej) získajú taníny obsahujúce monoméry katechínového typu červenú farbu.

Klasifikácia tanínov sa vykonáva pomocou nasledujúcich reakcií:

S 1% roztokom železo-amónneho kamenca (alebo iných zdrojov Fe3 + iónov): hydrolyzovateľné taníny dávajú čierno-modrú farbu a kondenzované - čierno-zelené;

Pri 10 % roztoku stredného octanu olovnatého v 10 % kyseline octovej: hydrolyzovateľné triesloviny sa vyzrážajú v bielej vločkovitej zrazenine, pričom kondenzované triesloviny zostávajú v roztoku a možno ich aj následne identifikovať (napr. zelenočiernym zafarbením Fe3+);

So zmesou 40% roztoku formaldehydu a koncentrovanej HCl: kondenzované triesloviny sa vyzrážajú, zatiaľ čo hydrolyzovateľné zostávajú vo vodnom roztoku (čo možno identifikovať podľa modročierneho sfarbenia v dodatočnom teste s Fe3+);

S kryštálmi NaNO2 a roztokom 0,1 M HCl: v prítomnosti tanínov v extrakte VP sa objavuje hnedá farba;

S roztokom HCl a pridaním 1% roztoku (alebo kryštálov) vanilínu, hydrolyzovateľné taníny, pozostávajúce z katechínových monomérov, dávajú po zahriatí jasne červenú farbu. Hydrolyzovateľné taníny, pozostávajúce z leukoantokyanidínových monomérov, sa dajú zistiť zahrievaním extraktu s roztokom HCl: objaví sa červené sfarbenie (v dôsledku tvorby antokyanidínov, ktoré pri kyslých hodnotách pH dávajú červenú farbu);

Keď sa pridá brómová voda a zahreje sa, kondenzované taníny v extrakte z VP sa vyzrážajú.

Pri chromatografickom stanovení tanínov sa na štartovaciu čiaru chromatografickej platne Silufol, umiestnenej v chromatografickej komore (s príslušnými rozpúšťadlami špecifikovanými v ND) nanesie etanolový extrakt z VP a po separácii sa platňa prehliadne v r. UV svetlo a je potrebné poznamenať, že niektoré deriváty katechínu majú modrú fluorescenciu, ktorá sa zvyšuje spracovaním chromatogramov s 1 % roztokom vanilínu v koncentrovanej HCl. Po uchovaní chromatogramov v pare HCl a následnom zahrievaní v sušiarni pri teplote 105 °C počas 2 minút sa taníny leukoantokyanidínového typu zmenia na ružové alebo červenofialové antokyanidíny.

Kvantifikácia tanínov

Metódy kvantitatívneho stanovenia tanínov vo VP môžeme rozdeliť na gravimetrické, titrimetrické a fyzikálno-chemické.

Gravimetrické metódy sú založené na kvantitatívnom vyzrážaní tanínov soľami ťažkých kovov, želatínou alebo adsorpciou cezmínovým práškom. Metódy zrážania tanínov octanom meďnatým alebo želatínou stratili svoj význam.

V kožiarskom priemysle sa však používa metóda jednotnej hmotnosti (BEM). Metóda je založená na schopnosti tanínov vytvárať pevné väzby s kožným kolagénom. Na tento účel sa výsledný vodný extrakt z MPC rozdelí na dve rovnaké časti. Jedna časť sa odparí, vysuší a odváži; druhá je ošetrená kožným (kožným) práškom, filtrovaná. Filtrát sa odparí, vysuší a odváži. Rozdiel medzi suchými zvyškami 1. a 2. časti (t.j. kontrola a skúsenosť) určuje obsah trieslovín v roztoku.

Titračná metóda obsiahnutá v SP RB (vydanie 2, s. 348), nazývaná Leventhal-Neubauerova metóda, je založená na oxidácii fenolových OH skupín manganistanom draselným (MnO4) v prítomnosti kyseliny indigosulfónovej, ktorá je regulátor a indikátor reakcie. Po úplnej oxidácii tanínov sa kyselina indigosulfónová začne oxidovať na isatín, v dôsledku čoho sa farba roztoku zmení z modrej na zlatožltú.

Ďalšou titračnou metódou na stanovenie trieslovín je metóda zrážania tanínu síranom zinočnatým s následnou komplexometrickou titráciou Trilonom B v prítomnosti xylénovej oranžovej (používa sa najmä na stanovenie tanínu v listoch sumachu trieslového a garbiarne ).

Fyzikálne a chemické metódy na stanovenie tanínov:

Kolorimetrické - spojené so schopnosťou tanínov dávať farebné zlúčeniny s kyselinami fosfor-molybdénovými alebo fosforovo-wolfrámovými v prítomnosti Na2CO3 alebo s Folin-Denisovým činidlom (pre fenoly). SP RB (zv. 1; 2.8.14) navrhuje fotokolorimetrické stanovenie tanínov extrahovaných z VP do vodného roztoku s roztokom fosfor-molybdénového činidla v prítomnosti uhličitanu sodného pri vlnovej dĺžke 760 nm;

Chromatospektrofotometrické a nefelometrické metódy, ktoré sa využívajú najmä vo vedeckom výskume.

Rozšírenie v rastlinnom svete, podmienky vzniku a úloha v rastlinách

Taníny sú široko rozšírené v rastlinnom svete. Nachádzajú sa v hubách, riasach, paprade, prasličkách, machoch, paličkových machoch a vo vyšších rastlinách (angiospermy a nahosemenné rastliny). Mnohé ihličnany akumulujú pomerne veľké množstvo tanínov. Ich maximálna akumulácia bola zistená u jednotlivých zástupcov dvojklíčnolistových rastlín, zatiaľ čo u jednoklíčnolistových rastlín bola zaznamenaná len u niektorých čeľadí. Nízky obsah trieslovín v obilninách. U dvojklíčnolistových patria do niektorých čeľadí (napríklad ružovité, pohánkovité, strukoviny, vŕby, škumpy, buk, vres) mnohé rody a druhy, kde obsah trieslovín dosahuje 20-30 % a viac. Najvyšší obsah trieslovín bol zistený v patologických útvaroch – hálkach (až 60 – 80 %). Drevité formy sú bohatšie na triesloviny ako bylinné. Taníny sú nerovnomerne rozložené v orgánoch a tkanivách rastlín. Hromadia sa najmä v kôre a dreve stromov a kríkov, ako aj v podzemných častiach bylinných trvaliek; zelené časti rastlín sú oveľa chudobnejšie na triesloviny. Taníny akumulujú najmä:

V podzemných orgánoch (Potentilla erectus, Burnet officinalis, Badan hrubolistý);

Kore (obyčajný dub);

Tráva (druhy ľubovníka bodkovaného);

Ovocie (čučoriedka obyčajná, čerešňa vtáčia, jelša lepkavá a

o. šedá);

Listy (činiaci sumach, skumpia kožená).

Taníny sa hromadia vo vakuolách a počas starnutia buniek sa adsorbujú na bunkové steny. Najčastejšie sa v rastlinách vyskytuje zmes hydrolyzovateľných a kondenzovaných tanínov s prevahou zlúčenín jednej alebo druhej skupiny.

Obsah tanínov v rastlinách sa mení v závislosti od vegetačného obdobia a veku rastlín. Ich akumulácia je súčasne sprevádzaná prudkým nárastom hmoty koreňových systémov. S vekom rastlín množstvo tanínov v nich klesá. Vegetačné obdobie ovplyvňuje nielen kvantitatívne, ale aj kvalitatívne zloženie tanínov.

Rastliny rastúce na slnku akumulujú viac tanínov ako tie, ktoré rastú v tieni (napríklad v tropických rastlinách tvoria oveľa viac ako v rastlinách miernych zemepisných šírok). Na obsah trieslovín v rastlinách má vplyv aj nadmorská výška, ročné obdobie – najmä v oblastiach s výraznou sezónnou klímou. Obsah trieslovín závisí od klimatických, pôdnych a genetických (dedičných) rastlinných faktorov.

Zistilo sa, že väčšina tanínov v listoch sa nachádza v parenchýmových bunkách obklopujúcich žilku, t.j. taníny sa tvoria v listoch a odtiaľ prechádzajú do floémových buniek vodivých zväzkov, cez ktoré sú prenášané cez rastlina. Majú baktericídne vlastnosti (vďaka ich fenolovej povahe), zabraňujú rozkladu dreva a sú látkami, ktoré chránia rastliny pred škodcami a patogénmi. Taníny sa tiež podieľajú na procesoch metabolizmu rastlín. Ukladajú sa ako náhradné produkty, ktoré sa potom môžu použiť počas jarného prebúdzania a rastu vegetatívnych orgánov.

Biomedicínske pôsobenie a aplikácia

Taníny a LR, ktoré ich obsahujú, sa používajú najmä ako adstringenty, protizápalové a hemostatické látky.

Tanínové roztoky sa viažu na kožné proteíny a vytvárajú vodu nepriepustný film. To je základ pre ich medicínske použitie vo forme adstringentov, keďže film vytvorený na slizniciach zabraňuje ďalšiemu zápalu a aplikovaný na ranu, zráža krv, a preto pôsobí ako lokálne hemostatiká. Vlastnosť tvorby filmu na jazyku určuje charakteristickú adstringentnú chuť tanínov.

Ako adstringenty;

Hemostatické činidlá;

Protizápalové lieky;

Antimikrobiálne látky;

a tiež ako:

P-vitamín a antisklerotické látky (hydrolyzovateľné a kondenzované taníny);

Antioxidanty a hypooxanty (kondenzované taníny);

Protinádorové činidlá (kondenzované taníny);

Protijedy pri otravách glykozidmi, alkaloidmi a soľami ťažkých kovov (taníny).

Ukázalo sa, že veľké dávky trieslovín majú protinádorový účinok, stredné dávky majú rádiosenzibilizačný účinok a malé dávky majú antiradiačný účinok.

Taníny sú tiež široko používané v kožiarskom, koňakovom a potravinárskom priemysle.

Zber VP s obsahom trieslovín

Zber sa vykonáva v období maximálneho obsahu trieslovín. Rýchlo sušte pri teplote 50-60°C, pretože dlhodobé skladovanie čerstvých surovín vedie k hydrolytickému štiepeniu hydrolyzovateľných a kondenzovaných tanínov pod vplyvom enzýmov. Sušené VP sa skladujú celé na suchom mieste v balenej forme. Počas skladovania drveného VP sa rýchlosť oxidácie tanínov zvyšuje a mení sa farba.

textové polia

textové polia

šípka_nahor

Taníny (taníny) - sú to komplexné zmesi rastlinných vysokomolekulárnych polymérov fenolových zlúčenín s molekulovou hmotnosťou 300 až 5000 (asi 500-3000), s adstringentnou chuťou, schopné vytvárať silné väzby s bielkovinami, premieňajúc surovú zvieraciu kožu na vyčinenú kožu.

Podstatou opaľovacieho procesu je vytvorenie pevných vodíkových väzieb medzi fenolickými hydroxylmi tanínov a molekulami kolagénových proteínov. Výsledkom je pevná zosieťovaná štruktúra – pokožka, odolná voči teplu, vlhkosti, mikroorganizmom, enzýmom, t.j. nezhnité.

Polyfenolové zlúčeniny s nižšou molekulovou hmotnosťou (menej ako 300) sa adsorbujú iba na proteíny, ale nie sú schopné vytvárať stabilné komplexy a nepoužívajú sa ako triesloviny. Polyfenoly s vysokou molekulovou hmotnosťou (s molekulovou hmotnosťou vyššou ako 5000) tiež nie sú opaľovacími činidlami, pretože ich molekuly sú príliš veľké a neprenikajú medzi kolagénové vlákna.

Hlavným rozdielom medzi tanínmi a inými polyfenolovými zlúčeninami je teda schopnosť vytvárať silné vodíkové väzby s proteínmi.

Pojem „taníny“ prvýkrát použil francúzsky vedec Seguin v roku 1796 na označenie látok prítomných v extraktoch určitých rastlín, ktoré môžu vykonávať proces opaľovania. Iný názov pre triesloviny – „taníny“ pochádza z latinizovanej formy keltského názvu pre dub – „ opálenie“, ktorého kôra sa už dlho používa na spracovanie kože.

Prvý vedecký výskum v oblasti chémie trieslovín sa datuje do druhej polovice 18. storočia. Boli spôsobené praktickými potrebami kožiarskeho priemyslu. Prvým publikovaným dielom je práca Gledicha (1754) „O použití čučoriedok ako suroviny na výrobu trieslovín“. Prvou monografiou bola Dekkerova monografia vydaná v roku 1913, ktorá zhrnula všetok nahromadený materiál o trieslovinách. Hľadanie, izoláciu a stanovenie štruktúry tanínov uskutočnili domáci vedci L.F. Ilyin, A.L. Kursanov, M.N. Zaprometov, F.M. Flavitsky, G. Povarnin, A.I. Oparin a ďalšie; zahraniční vedci G. Procter, K. Freidenberg, E. Fischer, P. Karrer a ďalší.

Distribúcia vo svete rastlín

textové polia

textové polia

šípka_nahor

Taníny sú vo voľnej prírode rozšírené. Nachádzajú sa najmä v rastlinách, ale nachádzajú sa aj v riasach, hubách a lišajníkoch. Najbežnejšie taníny medzi zástupcami dvojklíčnolistových, v ktorých sa hromadia v maximálnych množstvách. Jednoklíčnolistové triesloviny väčšinou neobsahujú, triesloviny sa nachádzajú v paprade a v prasličkách, machoch, machoch paličkových prakticky chýbajú, prípadne sú v minimálnom množstve.

Rodiny s najvyšším obsahom tanínov sú:

• škumpa - Anacardiaceae (škumpa opaľovacia, skumpia kožená);
• rosaceous - Rosaceae (pálenka lekárska, mochna vzpriamená);
• buk - Fagaceae (dub obyčajný (d. stopkatý) a d. skalnatý);
• pohánka - Polygonaceae (veľký hadec a z. mäsovočervený);
• vres - Ericaceae (medvedica, brusnica);
• breza - Betulaceae (jelša sivá a o. lepkavá) atď.

Úloha pre život rastlín

textové polia

textové polia

šípka_nahor

Biologická úloha pre život rastlín nebola úplne objasnená. Existuje niekoľko hypotéz:

1. taníny - odpadové produkty vitálnej činnosti rastlinných organizmov;
2. taníny sú jednou z foriem rezervných živín. Naznačuje to ich lokalizácia v podzemných orgánoch a kôre;
3. taníny vykonávajú ochrannú funkciu, tk. pri poškodení rastlín vytvárajú komplexy s proteínmi, ktoré vytvárajú ochranný film, ktorý zabraňuje prenikaniu fytopatogénnych organizmov. Majú baktericídne a fungicídne vlastnosti;
4. taníny sa podieľajú na redoxných procesoch, sú nosičmi kyslíka v rastlinách.

Biosyntéza, lokalizácia a akumulácia tanínov v rastlinách

textové polia

textové polia

šípka_nahor

Biosyntéza hydrolyzovateľných tanínov prebieha po dráhe šikimátu, kondenzované triesloviny vznikajú po zmiešanej dráhe (šikimát a acetát-malonát).

Taníny sú v rozpustenom stave vo vakuolách rastlinných buniek, pri starnutí buniek sa adsorbujú na bunkové steny. Sú lokalizované v bunkách epidermy, parietálnych bunkách obklopujúcich cievne zväzky (žilky listov), ​​v parenchýmových bunkách jadrových lúčov, kôry, dreva a floému.

Triesloviny sa vo veľkom množstve hromadia najmä v podzemných orgánoch viacročných bylinných rastlín (podzemky bergénie, hadec, škorica, podzemky a korene pálky), v kôre a dreve stromov a kríkov (kôra dubu, kalina), v ovocí ( plody čerešne vtáčej, čučoriedky, sadenice jelše), menej často v listoch (listy skumpie, sumach, čaj).

Akumulácia tanínov závisí od genetických faktorov, klimatických a environmentálnych podmienok. V bylinných rastlinách je spravidla minimálne množstvo tanínov zaznamenané na jar v období rastu výhonkov, potom sa ich obsah zvyšuje a dosahuje maximum v období pučania a kvitnutia (napríklad oddenky Potentilla). Do konca vegetačného obdobia sa množstvo trieslovín postupne znižuje. V spále sa maximum trieslovín hromadí vo fáze vývoja ružicových listov, vo fáze kvitnutia ich obsah klesá a na jeseň sa opäť zvyšuje. Vegetačná fáza ovplyvňuje nielen množstvo, ale aj kvalitatívne zloženie tanínov. Na jar, v období prúdenia miazgy v kôre stromov a kríkov a vo fáze opätovného rastu výhonkov bylinných rastlín, sa hromadia najmä hydrolyzovateľné triesloviny a na jeseň vo fáze odumierania rastlín kondenzované taníny a ich produkty polymerizácie. , flobafény (červené).

Najpriaznivejšie podmienky pre akumuláciu tanínov sú podmienky mierneho podnebia (lesná zóna a vysokohorský alpský pás).

Najvyšší obsah trieslovín bol zaznamenaný v rastlinách rastúcich na hustých vápenatých pôdach, na kyprej černozeme a piesočnatých pôdach je ich obsah nižší. Pôdy bohaté na fosfor prispievajú k hromadeniu trieslovín, pôdy bohaté na dusík znižujú obsah trieslovín.

Zber, sušenie a skladovanie surovín s obsahom trieslovín

textové polia

textové polia

šípka_nahor

Zber liečivých rastlinných materiálov obsahujúcich triesloviny sa vykonáva podľa všeobecných pravidiel. Existuje však niekoľko výnimiek z pravidla:

• Oddenky potentilla sa zbierajú v lete, počas kvitnutia, pretože. obsah kondenzovaných tanínov v nich je pomerne veľký a zohľadňujú aj skutočnosť, že po odkvitnutí rastliny a uschnutí jej nadzemnej časti na jeseň je takmer nemožné odhaliť mochuľu v poraste bažiny Miesta;
• oddenky cievky sa vykopávajú ihneď po odkvitnutí rastliny;
• oddenky a korene horca by sa mali vykopávať počas obdobia plodenia, keď sú v poraste ľahko viditeľné tmavočervené kvetenstvo;
• sadenice jelše sa zberajú koncom jesene alebo zimy, keď listy neprekážajú.

Nazbierané suroviny sušte v sušičkách pri teplote nepresahujúcej 60 ºС (40-60 ºС). Pri prirodzenom sušení sa suroviny ukladajú v tenkej vrstve na čerstvom vzduchu alebo v uzavretej vetranej miestnosti.

Suroviny je možné sušiť na slnku, pretože. triesloviny sa vplyvom ultrafialových lúčov nerozkladajú.

Skladovanie surovín obsahujúcich triesloviny by malo byť v súlade so všeobecnými pravidlami. Plody čerešne a čučoriedky sa skladujú oddelene spolu s ostatným ovocím. Sadenice jelše sa skladujú spolu so všetkými druhmi surovín, pretože. sadenice sú drevnaté a ako ukazujú skúsenosti, nepoškodzujú ich škodcovia sýpky.

Fyzikálne a chemické vlastnosti

textové polia

textové polia

šípka_nahor

Taníny sú izolované z rastlinných surovín vo forme zmesi polymérov a sú to amorfné látky žltej alebo žltohnedej farby, bez zápachu, sťahujúcej chuti, veľmi hygroskopické. Dobre sa rozpúšťajú vo vode (najmä v horúcej vode) za tvorby koloidných roztokov, sú rozpustné aj v etylalkoholoch a metylalkoholoch, acetóne, etylacetáte, butanole, pyridíne. Nerozpustný v chloroforme, benzéne, dietyléteri a iných nepolárnych rozpúšťadlách, opticky aktívny.

Ľahko oxiduje na vzduchu. Schopný vytvárať silné medzimolekulové väzby s proteínmi a inými polymérmi (pektické látky, celulóza atď.). Pôsobením enzýmov a kyselín sa hydrolyzovateľné taníny rozkladajú na svoje zložky, kondenzované taníny polymerizujú.

Z vodných roztokov vyzrážaných želatínou, alkaloidmi, octanom olovnatým, dvojchrómanom draselným, kardiotonickými glykozidmi.

Taníny sa ako látky fenolovej povahy ľahko oxidujú manganistanom draselným v kyslom prostredí a inými oxidačnými činidlami, vytvárajú farebné komplexy so soľami ťažkých kovov, trojmocného železa a brómovej vody.

Môže sa ľahko adsorbovať na kožný prášok, celulózu, vatu.

Analýza surovín obsahujúcich triesloviny

textové polia

textové polia

šípka_nahor

Na získanie množstva tanínov sa rastlinné suroviny extrahujú horúcou vodou v pomere 1:30 alebo 1:10.

Kvalitatívna analýza

Využívajú sa kvalitatívne reakcie (precipitácia a farba) a chromatografické vyšetrenie.

ja Všeobecné zrážacie reakcie– na zistenie trieslovín v surovinách:

1. Špecifickou reakciou je zrážacia reakcia želatíny s použitím 1% roztoku želatíny v 10% roztoku chloridu sodného. Objaví sa vločkovitá zrazenina alebo zákal, ktorý zmizne, keď sa pridá nadbytok želatíny. Negatívna reakcia so želatínou naznačuje neprítomnosť trieslovín.
2. Reakcia so soľami alkaloidov s použitím 1% roztoku chinínchloridu. Vzniká amorfná zrazenina v dôsledku tvorby vodíkových väzieb medzi hydroxylovými skupinami tanínov a atómami dusíka alkaloidu.

Tieto reakcie poskytujú rovnaký účinok bez ohľadu na skupinu tanínov. Množstvo reakcií umožňuje určiť, či taníny patria do určitej skupiny.

II. Skupina kvalitatívne reakcie pre taníny:

№	Činidlo	Hydrolyzovateľné taníny	Kondenzované taníny
1	zriedená kyselina sírová	hydrolýza	červeno-hnedý flobafen (kraseni)
2	brómová voda (5 g brómu v 1 litri vody)	———	oranžová alebo žltá zrazenina
3	1% roztok železno-amónneho kamenca (chlorid železitý sa nepoužíva, pretože jeho roztok má kyslú reakciu)	čierno-modré sfarbenie alebo sediment	čierno-zelené sfarbenie alebo sediment
4	10% roztok octanu olovnatého (súčasne pridať 10% roztok kyseliny octovej)	biela zrazenina, nerozpustná v kyseline octovej (zrazenina sa odfiltruje a stanoví sa obsah kondenzovaných tanínov vo filtráte, 1% roztokom železo-amónneho kamenca - čierno-zelené sfarbenie)	biela zrazenina, rozpustná v kyseline octovej
5	Stiasni test (40% roztok formaldehydu s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou)	———	tehlovočervená zrazenina (zrazenina sa odfiltruje a vo filtráte sa stanoví obsah hydrolyzovateľných tanínov, v neutrálnom prostredí s 1% roztokom železno-amónneho kamenca - čierno-modré sfarbenie)
6	1% roztok vanilínu v koncentrovanej kyseline chlorovodíkovej	———	oranžovo-červené sfarbenie (katechíny)

Reakcia s 1% alkoholovým roztokom železo-amónneho kamenca je zahrnutá vo všetkých regulačných dokumentoch pre liečivé suroviny ako reakcia na určenie ich pravosti. Reakciu odporúča GF XI a vykonáva sa tak s odvarom surovín (dubová kôra, hadcové podzemky, sadenice jelše, čučoriedky), ako aj na otvorenie trieslovín priamo v suchých surovinách (dubová kôra, kalina, podzemky bergénie) .

kvantifikácia

Existuje asi 100 rôznych metód na kvantitatívne stanovenie tanínov, ktoré možno rozdeliť do nasledujúcich hlavných skupín.

1. gravimetrický, alebo podľa hmotnosti metódy- založené na kvantitatívnom vyzrážaní tanínov želatínou, iónmi ťažkých kovov alebo adsorpciou kožným (nahým) práškom.

Pre technické účely je celosvetovo štandardná gravimetrická metóda s použitím holla prášku - vážená jednotná metóda (BEM).

Vodný extrakt trieslovín je rozdelený na dve rovnaké časti. Jedna časť extraktu sa odparí a vysuší do konštantnej hmotnosti. Ďalšia časť extraktu sa ošetrí kožným púdrom a prefiltruje. Taníny sa adsorbujú na kožený prášok a zostávajú na filtri. Filtrát a premývacie kvapaliny sa odparia a vysušia do konštantnej hmotnosti. Obsah tanínov sa vypočíta z rozdielu hmotnosti sušiny.

Metóda je nepresná, pretože pleťový púder tiež adsorbuje fenolové zlúčeniny s nízkou molekulovou hmotnosťou, čo je dosť prácne a drahé.

1. Titračný metódy. Tie obsahujú:

a) Želatínový metóda- založený na schopnosti tanínov vytvárať nerozpustné komplexy s bielkovinami. Vodné extrakty zo surovín sa titrujú 1% roztokom želatíny, v bode ekvivalencie sa komplexy želatína tanát rozpúšťajú v nadbytku činidla. Titer je určený čistým tanínom. Bod ekvivalencie sa určí výberom najmenšieho objemu titrovaného roztoku, ktorý spôsobí úplné vyzrážanie tanínov.

Metóda je najpresnejšia, pretože umožňuje určiť množstvo pravých tanínov. Nevýhody: dĺžka definície a náročnosť stanovenia bodu ekvivalencie.

b) Permanganometrické metóda(Leventhal-Neubauerova metóda modifikovaná A.L. Kursanovom). Táto liekopisná metóda je založená na ľahkej oxidovateľnosti tanínov manganistanom draselným v kyslom prostredí za prítomnosti indikátora a katalyzátora kyseliny indigosulfónovej, ktorá sa v bode ekvivalencie mení na isatín a farba roztoku sa mení z modrej. do zlatožltej.

Vlastnosti stanovenia, ktoré umožňujú titrovať iba makromolekuly tanínov: titrácia sa vykonáva vo vysoko zriedených roztokoch (extrakcia sa zriedi 20-krát) pri teplote miestnosti v kyslom prostredí, za intenzívneho miešania sa pomaly po kvapkách pridáva manganistan draselný.

Metóda je ekonomická, rýchla, ľahko vykonateľná, ale nie dostatočne presná, pretože manganistan draselný čiastočne oxiduje fenolové zlúčeniny s nízkou molekulovou hmotnosťou.

1. Fyzikálno-chemické metódy.

a) Fotoelektrokolorimetrické metódy sú založené na schopnosti tanínov vytvárať farebné zlúčeniny s železitými soľami, kyselinou fosforečnou a volfrámovou, Folin-Denisovým činidlom atď.

b) Chromatospektrofotometrická a nefelometrické metódy používané vo vedeckom výskume.

Spôsoby využitia surovín, medicínske aplikácie, prípravky

textové polia

textové polia

šípka_nahor

Okrem zdrojov priemyselnej výroby liečivého tanínu sú všetky skúmané objekty zahrnuté do objednávky č. 79 zo dňa 18.3.1997, ktorá umožňuje bezpredpisový predaj surovín z lekární.

V extemporských receptoch a doma sa suroviny používajú vo forme odvarov a ako súčasť poplatkov.

Rastlinné prípravky sa nevyrábajú (tekuté výťažky z podzemkov bergénie a podzemkov a koreňov sú v súčasnosti vyradené zo štátneho registra).

Tanín a kombinované prípravky „Tanalbin“ (komplex tanínu s kazeínovým proteínom) a „Tansal“ (komplex tanalbínu s fenylsalicylátom) sa získavajú z listov trieslovín, sumachu, čínskej a tureckej hálky. Zo sadeníc jelše sa získala droga "Altan".

Používajú sa suroviny a prípravky s obsahom trieslovín navonok aj dovnútra

• adstringenty,
• protizápalový,
• baktericídne a
• hemostatické činidlá.

Na základe akcie o schopnosti tanínov viazať sa na bielkoviny za vzniku hustých albuminátov. Pri kontakte so zapálenou sliznicou alebo povrchom rany sa vytvorí tenký povrchový film, ktorý chráni citlivé nervové zakončenia pred podráždením. Dochádza k utesneniu bunkových membrán, zúženiu krvných ciev, znižuje sa uvoľňovanie exsudátov, čo vedie k zníženiu zápalového procesu.

Vďaka schopnosti tanínov vytvárať zrazeniny s alkaloidmi, kardiotonickými glykozidmi, soľami ťažkých kovov, ich používané ako antidotá v prípade otravy týmito látkami.

Navonok

• s ochoreniami ústnej dutiny, hltana, hrtana (stomatitída, gingivitída, faryngitída, tonzilitída), ako aj
• na popáleniny sa používajú odvary z dubovej kôry, odnože bergénie, hadec, cinquefoil, oddenky a korene horčiny, tanín, "Altan".

vnútri

• pri ochoreniach tráviaceho traktu (kolitída, enterokolitída, hnačka, úplavica) sa používajú tanínové prípravky (Tanalbin, Tansal), Altan, odvary z čučoriedok, čerešne vtáčej (najmä v pediatrickej praxi), sadenice jelše, rizómy bergénie, hadec , silinka, podzemky a korene pálenky.

Ako hemostatická fondy

• na maternicové, žalúdočné a hemoroidné krvácanie sa používajú odvary z kôry kaliny, podzemkov a koreňov horca, podzemkov škorice, semenáčikov jelše.

Odvary sa pripravujú v pomere 1:5 alebo 1:10.

Nepoužívajte veľmi koncentrované odvary , pretože v tomto prípade albuminátový film vyschne, objavia sa praskliny a dôjde k sekundárnemu zápalovému procesu.

Experimentálne stanovené protinádorová aktivita triesloviny vodný extrakt z oplodia granátového jablka (na lymfosarkóm, sarkóm a iné choroby) a prípravok "Hanerol", získaný na báze ellagitanínov a polysacharidov z kvetenstva angustifolia fireweed (vŕba) (na rakovinu žalúdka a pľúc ).

Výstup zbierky:

METÓDY KVANTITATÍVNEHO STANOVENIA TANÍNOV V LIEČIVÝCH RASTLINNÝCH SUROVINÁCH

Michajlová Elena Vladimirovna

cand. biol. Sci., Assistant, VSMA pomenovaná po V.I. N.N. Burdenko,

Voronež

Email: milenok[chránený e-mailom] rambler.en

Vasilyeva Anna Petrovna

Martynová Daria Mikhailovna

študent VGMA. N.N. Burdenko, Voronež

Email: darjamartynova[chránený e-mailom] rambler.en

Taníny (DV) sú veľmi rozšírenou skupinou biologicky aktívnych látok (BAS) rastlín, ktoré majú rôzne farmakologické vlastnosti, čo je dôvodom ich širokého využitia v medicíne. Preto je problém stanovenia dobrej kvality liečiv a liečivých rastlinných surovín (MPR) obsahujúcich túto skupinu biologicky aktívnych látok veľmi aktuálny. Jednou z hlavných metód na stanovenie dobrej kvality MPS je kvantitatívna fytochemická analýza. V súčasnosti existuje niekoľko metód, ktoré umožňujú tento typ analýzy MPC obsahujúceho DV, ale údaje z literatúry sú rozptýlené. V súvislosti s vyššie uvedeným je potrebné systematizovať metódy kvantitatívnej analýzy DVvLRS.

Klasickými metódami stanovenia obsahu účinných látok sú gravimetrické (hmotnostné) a titrimetrické metódy. Gravimetrická metóda je založená na vlastnosti účinných látok vyzrážať sa želatínou, iónmi ťažkých kovov a kožným (nahým) práškom. Prvým krokom je stanovenie hmotnosti suchého zvyšku vo vodnom extrakte z MPC. Extrakt sa potom suší do konštantnej hmotnosti. Ďalšou fázou je uvoľnenie extraktu z účinnej látky spracovaním s cezmínovým práškom. V tomto prípade sa vyzráža zrazenina, ktorá sa potom odstráni filtráciou, opäť sa stanoví množstvo suchého zvyšku a množstvo AI sa stanoví rozdielom v uvedených hmotnostiach suchého zvyšku.

Titrimetrické metódy zahŕňajú:

1. Titrácia roztokom želatíny. Táto metóda je tiež založená na vlastnosti účinných látok vyzrážať sa proteínmi (želatína). Vodné extrakty zo surovín sa titrujú 1% roztokom želatíny. Titer je určený čistým tanínom. Bod ekvivalencie sa nastavuje výberom najmenšieho objemu titrantu, ktorý spôsobí úplné vyzrážanie účinných látok. Táto metóda je vysoko špecifická a umožňuje vám stanoviť obsah skutočnej DV, ale pri vykonávaní je pomerne dlhá a stanovenie bodu ekvivalencie závisí od ľudského faktora.

2. Manganatometrická titrácia. Táto metóda je prezentovaná v Monografii všeobecného liekopisu a je založená na ľahkej oxidovateľnosti DV manganistanom draselným v kyslom prostredí v prítomnosti kyseliny indigosulfónovej. Na konci titrácie sa farba roztoku zmení z modrej na zlatožltú. Napriek hospodárnosti, rýchlosti a jednoduchosti implementácie nie je metóda dostatočne presná, čo je spojené s ťažkosťami pri stanovení bodu ekvivalencie, ako aj s nadhodnotením výsledkov merania v dôsledku silnej oxidačnej schopnosti titrantu.

3. Komplexometrická titrácia Trilonom B s predbežným vyzrážaním DV síranu zinočnatého. Metóda sa používa na kvantitatívne stanovenie tanínu v surovinách sumachu trieslovín a sumachu. Ako indikátor sa používa xylenolová pomaranč.

Fyzikálno-chemické metódy na kvantitatívne stanovenie DV v liečivých rastlinných materiáloch zahŕňajú fotoelektrokolorimetrickú, spektrofotometrickú, amperometrickú metódu a metódu potenciometrickej a coulometrickej titrácie.

1. Fotoelektrokolorimetrická metóda. Je založená na schopnosti DI vytvárať farebné chemické zlúčeniny so železitými soľami, kyselinou fosfowolfrámovou, Folin-Denisovým činidlom a inými látkami. Jedno z činidiel sa pridá do študovaného extraktu z MPC, po objavení sa stabilnej farby sa na fotokolorimetri zmeria optická hustota. Percento AI sa určí z kalibračnej krivky zostrojenej s použitím série tanínových roztokov so známou koncentráciou.

2. Spektrofotometrické stanovenie. Po získaní vodného extraktu sa jeho časť odstreďuje 5 minút pri 3000 ot./min. Do centrifúgy sa pridá 2% vodný roztok molybdénanu amónneho, potom sa zriedi vodou a nechá sa 15 minút. Intenzita výslednej farby sa meria na spektrofotometri pri vlnovej dĺžke 420 nm v kyvete s hrúbkou vrstvy 10 mm. Výpočet tanidov sa vykonáva podľa štandardnej vzorky. GSO tanínu sa používa ako štandardná vzorka.

3. Chromatografické stanovenie. Na identifikáciu kondenzovaných tanínov sa získa alkohol (95 % etylalkohol) a vodné extrakty a vykoná sa papierová a tenkovrstvová chromatografia. GSO katechínu sa používa ako štandardná vzorka. Separácia sa uskutočňuje v rozpúšťadlových systémoch butanol - kyselina octová - voda (BUW) (40:12:28), (4:1:2), 5% kyselina octová na papieri Filtrak a doskách Silufol. Detekcia zón látok na chromatograme sa uskutočňuje v UV svetle, po ktorom nasleduje ošetrenie 1% roztokom železo-amónneho kamenca alebo 1% roztokom vanilínu, koncentrovaná kyselina chlorovodíková. V budúcnosti je možné vykonať kvantitatívnu analýzu elúciou z platne DV etylalkoholom a vykonať spektofotometrickú analýzu, pričom sa získa absorpčné spektrum v rozsahu 250-420 nm.

4. Amperometrická metóda. Podstatou metódy je meranie elektrického prúdu, ktorý vzniká pri oxidácii –OH skupín prírodných fenolických antioxidantov na povrchu pracovnej elektródy pri určitom potenciáli. Predbežne sa zostrojí grafická závislosť signálu referenčnej vzorky (kvercetínu) od jej koncentrácie a pomocou výslednej kalibrácie sa vypočíta obsah fenolov v skúmaných vzorkách v jednotkách koncentrácie kvercetínu.

5. Potenciometrická titrácia. Tento typ titrácie vodného extraktu (najmä odvary z dubovej kôry) sa uskutočnil s roztokom manganistanu draselného (0,02 M), výsledky sa zaznamenali pomocou pH metra (pH-410). Stanovenie koncového bodu titrácie sa uskutočnilo podľa Granovej metódy s použitím počítačového programu "GRAN v.0.5". Potenciometrický typ titrácie poskytuje presnejšie výsledky, keďže bod ekvivalencie je v tomto prípade jasne fixovaný, čím sa eliminuje skreslenie výsledkov spôsobené ľudským faktorom.Potenciometrická titrácia je obzvlášť dôležitá v porovnaní s indikátorovou titráciou pri štúdiu farebných roztokov, ako sú vodné extrakty obsahujúce AD.

6. Coulometrická titrácia. Metóda kvantitatívneho stanovenia obsahu účinných látok v PM v prepočte na tanín coulometrickou titráciou spočíva v tom, že skúmaný extrakt zo suroviny reaguje s coulometrickým titračným činidlom - hypojoditovými iónmi, ktoré vznikajú pri disproporcionácii elektrogenerovaného jódu v alkalickom prostredí. stredná. Elektrogenerácia hypojoditových iónov sa uskutočňuje z 0,1 M roztoku jodidu draselného vo fosfátovom tlmivom roztoku (pH 9,8) na platinovej elektróde pri konštantnej sile prúdu 5,0 mA.

Na kvantitatívne stanovenie DV v MHM sa teda používajú také metódy na kvantitatívne stanovenie DV v MHM, ako sú titrimetrické metódy (vrátane titrácie želatínou, manganistanom draselným, komplexometrickej titrácie Trilonom B, potenciometrickej a coulometrickej titrácie), gravimetrické fotoelektrokolorimetrické, spektrofotometrické a amperometrické metódy.

Bibliografia:

1. Vasilyeva A.P. Štúdium dynamiky obsahu trieslovín v odvare z dubovej kôry pri skladovaní // Bulletin Inovácie mládeže. - 2012. - V. 1, č. 1. - S. 199-200.
2. Štátny liekopis ZSSR, vydanie XI, č. 1. - M.: Medicína, 1987. - 336 s.
3. Grinkevič N.I., L.N. Safronych Chemický rozbor liečivých rastlín. - M., 1983. - 176 s.
4. Ermakov A.I., Arasimovič V.V. Stanovenie celkového obsahu tanínov. Metódy biologického výskumu rastlín: Uch. úžitok. Leningrad: Agropromizdat. 1987. - 456 s.
5. Islambekov Sh.Yu. Karimdžanov S.M., Mavlyanov A.K. Rastlinné taníny // Chémia prírodných zlúčenín. - 1990. - č. 3. - C. 293-307.
6. Kemertelidze E.P., Yavich P.A., Sarabunovich A.G. Kvantitatívne stanovenie tanínu // Lekáreň. - 1984. Číslo 4. - S. 34-37.
7. Pat. Ruská federácia č. 2436084 Metóda coulometrického stanovenia obsahu tanínov v rastlinných surovinách; dec. 4.6.2010, zverejnené. 10. 12. 2011. [Elektronický zdroj]. Režim prístupu. URL: http://www.freepatent.ru/patents/2436084 (dátum prístupu: 2.12.2012).
8. Ryabinina E.I. Porovnanie chemicko-analytických metód na stanovenie tanínov a antioxidačnej aktivity rastlinných surovín // Analytika a kontrola. - 2011. - V. 15, č. 2. - S. 202-204.
9. Fedoseeva L.M. Štúdium trieslovín podzemných a nadzemných vegetatívnych orgánov badanu hrubolistého, rastúceho na Altaji. // Chémia rastlinných surovín. - 2005. Číslo 3. S. 45-50.

Majitelia patentu RU 2439568:

Vynález sa týka oblasti farmakológie a môže sa použiť na stanovenie tanínov v rastlinných materiáloch. Metóda stanovenia tanínov v rastlinných surovinách spočíva v extrakcii vzorky surovín vodou pri varení, chladení, filtrovaní, meraní optickej hustoty alikvotnej vzorky pri vlnovej dĺžke 277 nm a výpočte obsahu súčtu všetkých tanínov. podľa určitého vzorca, potom pridanie do alikvotnej vzorky filtrátu 1 % roztok kolagénu v 1 % kyseline octovej sa pretrepe, prefiltruje, zmeria sa optická hustota filtrátu pri vlnovej dĺžke 277 nm a obsah zrazeniny taníny sa vypočíta pomocou určitého vzorca. Metóda umožňuje zvýšiť presnosť stanovenia obsahu tanínov v rastlinných surovinách a selektívne stanoviť zrážané a nezrážané triesloviny v rastlinných surovinách.

Vynález sa týka farmaceutického priemyslu, oblasti farmakognózie a farmaceutickej chémie a môže byť použitý na kontrolu kvality rastlinných materiálov obsahujúcich triesloviny.

Známa metóda na stanovenie tanínov v liečivých rastlinných materiáloch (MPR) coulometriou z hľadiska tanínu (S. G. Abdullina a kol. Coulometrické stanovenie tanínov v liečivých rastlinných materiáloch. // Lekáreň. č. 4. - 2010. - P. 13 - pätnásť).

Nevýhodou tejto metódy je použitie prídavného zariadenia (coulometer), špecifického titračného činidla (hypojodid draselný), ktorý sa z hľadiska oxidačných vlastností približuje manganistanu draselnému a neumožňuje rozlíšiť vysokomolekulárne a nízkomolekulárne taníny.

Známa je aj metóda na stanovenie obsahu tanínu a derivátov kyseliny galovej v čaji pomocou konduktometrie (Patent č. 2127878. Metóda na samostatné stanovenie tanínu a katechínov (v zmysle kyseliny galovej) v čaji. M.: 1999).

Nevýhodou tejto metódy je použitie toxických organických rozpúšťadiel (izobutylalkohol), ako aj použitie farebnej reakcie s Fe (III), ktorej produktom je farebne nestála farebne časovo nestála farebná zlúčenina.

Známa je aj metóda kvantitatívneho stanovenia tanínov z hľadiska tanínu v listoch skumpie a sumachu metódou komplexometrie po vyzrážaní tanínov soľami zinku (GOST 4564-79. List skumpie. Špecifikácie; GOST 4565- 79. List škumpy. Špecifikácie).

Nevýhodou tejto metódy je trvanie analýzy a náročnosť určenia bodu ekvivalencie.

Známa je aj metóda kvantitatívneho stanovenia tanínov spektrofotometrickou metódou po reakcii s Folin-Ciocalteuovým činidlom z hľadiska kyseliny galovej (Smernice pre metódy kontroly kvality a bezpečnosti biologicky aktívnych doplnkov stravy. Smernica. R 4.1.1672 -03. - M. - 2004 - s.94-95).

Nevýhodou tejto metódy je nemožnosť samostatného stanovenia tanínov s nízkou a vysokou molekulovou hmotnosťou.

Najbližšie k navrhovanej metóde je, že triesloviny sa stanovujú spektrofotometricky z hľadiska kyseliny galovej (Smernice pre metódy kontroly kvality a bezpečnosti biologicky aktívnych doplnkov stravy. Smernica. R 4.1.1672-03. - M. - 2004 g. - P 120).

Nevýhodou tejto metódy je opakované riedenie testovanej vzorky, v dôsledku čoho sa zle stanoví koncentrácia tanínov v roztoku. Aj pri tejto metóde je referenčným roztokom tlmivý roztok, čo sťažuje analýzu. Okrem toho táto metóda neumožňuje oddelene stanoviť obsah tanínov s nízkou a vysokou molekulovou hmotnosťou.

Cieľom vynálezu je zlepšiť presnosť stanovenia tanínov a možnosť oddeleného stanovenia zrážaných a nevyzrážateľných tanínov v rastlinných surovinách.

Problém je vyriešený tým, že vzorka suroviny sa pri varení extrahuje vodou, ochladí, prefiltruje, meria sa optická hustota alikvotnej vzorky pri vlnovej dĺžke 277 nm a obsah súčtu všetkých tanínov vypočítané podľa vzorca

50 - objem banky, ml,

W - vlhkosť suroviny, %,

k alikvotnej časti filtrátu sa pridá 1 % roztok kolagénu v 1 % kyseline octovej, pretrepe sa, prefiltruje, meria sa optická hustota filtrátu pri vlnovej dĺžke 277 nm a obsah vyzrážaných tanínov sa vypočíta podľa vzorca

D 1 - optická hustota roztoku 1,

D 2 - optická hustota roztoku 2,

m nav - hmotnosť vzorky surovín, g,

V a - objem alikvotnej vzorky, ml,

250 - celkový extrakčný objem, ml,

50 - objem banky, ml,

508 - špecifický absorpčný index kyseliny galovej (optická hustota 1% roztoku kyseliny galovej 1 mg / ml),

W - vlhkosť suroviny, %.

Prakticky sa spôsob uskutočňuje nasledovne. Asi 2,0 (presne odvážených) rozdrvených surovín, preosiatych cez sito s priemerom otvoru 3 mm, dáme do 500 ml banky, zalejeme 250 ml vody zohriatej na bod varu a varíme 30 minút pod spätným chladičom za občasného miešania. Ochlaďte na izbovú teplotu, rozrieďte vodou na 250 ml, prefiltrujte cez vatu, aby sa častice suroviny nedostali do vodného extraktu. Prvých 50 ml filtrátu sa vyhodí.

1 – 4 ml vodného extraktu sa umiestni do 50 ml odmernej banky upravenej po značku vodou (roztok 1). Zmerajte optickú hustotu roztoku 1 pri vlnovej dĺžke 277 nm. Na porovnanie sa používa voda.

30 ml vodného extraktu sa umiestni do odmernej nádoby s objemom 50 ml, pridá sa 2-10 ml zrážacieho činidla, pretrepáva sa 30-60 minút, usadí sa, prefiltruje sa. 1 – 4 ml výsledného filtrátu sa prenesie do banky s objemom 50 ml, upravenej po značku vodou (roztok 2). Zmerajte optickú hustotu roztoku 2 pri vlnovej dĺžke 277 nm. Na porovnanie sa používa voda.

Vynález je ilustrovaný nasledujúcimi príkladmi.

Príklad 1. Na analýzu sa odobrali rastlinné suroviny - dubová kôra.

Asi 2,0 (presne odváženej) drvenej surovej dubovej kôry, preosiatej cez sito s priemerom otvoru 3 mm, sa vloží do 500 ml banky, zaleje sa 250 ml vody zohriatej do varu a varí sa 30 minút pod spätným chladičom za občasného miešania. . Ochlaďte na izbovú teplotu, rozrieďte vodou na 250 ml, prefiltrujte cez vatu, aby sa častice suroviny nedostali do vodného extraktu. Prvých 50 ml filtrátu sa vyhodí.

2 ml vodného extraktu z dubovej kôry sa naleje do odmernej banky s objemom 50 ml, upravenej vodou po značku (roztok 1). Zmerajte optickú hustotu roztoku 1 pri vlnovej dĺžke 277 nm. Na porovnanie sa používa voda. D 1 pre dubovú kôru je 0,595.

30 ml vodného extraktu sa umiestni do odmernej nádoby s objemom 50 ml, pridajú sa 2 ml zrážacieho činidla, pretrepáva sa 30 minút, usadí sa, prefiltruje sa. 2 ml získaného filtrátu sa prenesie do banky s objemom 50 ml, upravenej po značku vodou (roztok 2). Zmerajte optickú hustotu roztoku 2 pri vlnovej dĺžke 277 nm. Na porovnanie sa používa voda. D 2 pre dubovú kôru je 0,276.

Príklad 2. Na analýzu sa odobral rastlinný materiál hadovitého podzemku.

Asi 2,0 (presne odvážené) rozdrvenej suroviny hadovitého podzemku, preosiateho cez sito s priemerom otvoru 3 mm, sa vloží do banky s objemom 500 ml, zaleje sa 250 ml vody zohriatej do varu a varí sa 30 minút pod spätným chladičom za občasného miešania. Ochlaďte na izbovú teplotu, rozrieďte vodou na 250 ml, prefiltrujte cez vatu, aby sa častice suroviny nedostali do vodného extraktu. Prvých 50 ml filtrátu sa vyhodí.

Do odmernej banky s objemom 50 ml upravenej vodou po značku (roztok 1) sa vloží 1 ml vodného extraktu z podzemku špirály. Zmerajte optickú hustotu roztoku 1 pri vlnovej dĺžke 277 nm. Na porovnanie sa používa voda.

30 ml vodného extraktu sa umiestni do 50 ml odmernej nádoby, pridá sa 7 ml zrážacieho činidla, pretrepáva sa 60 minút, usadí sa, prefiltruje. 1 ml získaného filtrátu sa prenesie do banky s objemom 50 ml, upravenej po značku vodou (roztok 2). Zmerajte optickú hustotu roztoku 2 pri vlnovej dĺžke 277 nm. Na porovnanie sa používa voda.

Navrhovaná metóda zlepšuje presnosť stanovenia obsahu tanínov v rastlinných surovinách a selektívne stanovenie zrážaných a nezrážaných tanínov v rastlinných surovinách.

Metóda stanovenia tanínov v rastlinných surovinách z hľadiska kyseliny galovej, ktorá spočíva v extrakcii vzorky surovín vodou pri varení, chladení, filtrovaní, meraní optickej hustoty alikvotnej vzorky pri vlnovej dĺžke 277 nm a výpočte tzv. obsah súčtu všetkých tanínov podľa vzorca:

kde x a - obsah súčtu tanínov v kyseline galovej, %;




50 - objem banky, ml;
508 - špecifický absorpčný index kyseliny galovej (optická hustota 1% roztoku kyseliny galovej 1 mg/ml);
W - vlhkosť suroviny, %,
k alikvotnej časti filtrátu sa pridá 1 % roztok kolagénu v 1 % kyseline octovej, pretrepe sa, prefiltruje, meria sa optická hustota filtrátu pri vlnovej dĺžke 277 nm a obsah vyzrážaných tanínov sa vypočíta podľa vzorca :

kde X je obsah vyzrážaných tanínov vyjadrený v kyseline galovej, %;
D 1 - optická hustota roztoku 1;
D 2 - optická hustota roztoku 2;
m nav - hmotnosť vzorky surovín, g;
V a - objem alikvotnej vzorky, ml;
250 - celkový objem extrakcie, ml;
50 - objem banky, ml;
508 - špecifický absorpčný index kyseliny galovej (optická hustota 1% roztoku kyseliny galovej 1 mg/ml);
W - vlhkosť suroviny, %.

Podobné patenty:

Vynález sa týka medicíny, menovite psychoneurológie, a opisuje spôsob predpovedania obnovy neurologických funkcií u pacientov v akútnom období ischemickej cievnej mozgovej príhody uskutočňovaním klinických a biochemických štúdií celkovej koncentrácie albumínu (TAC) v krvnom sére v g. /l, kde navyše o 5-7 V deň ochorenia sa stanoví efektívna koncentrácia albumínu (ECA), vypočíta sa rezerva viazania albumínu (ARA) a ak je tento ukazovateľ menší ako jedna, negatívny výsledok predpokladá sa obnovenie neurologických funkcií u pacientov v akútnom období ischemickej cievnej mozgovej príhody.

Vynález sa týka medicíny, biologického výskumu v onkológii a možno ho použiť na určenie vývoja malígneho procesu pri nádoroch mozgu po chirurgickej liečbe.

Vynález sa týka oblasti medicíny, konkrétne onkológie, a opisuje spôsob hodnotenia účinnosti neoadjuvantnej chemoterapie pri rakovine močového mechúra vyšetrením pacienta, pri ktorom sa zaznamenáva maximálna intenzita autofluorescencie nádorového tkaniva v zelenej oblasti spektra. v štádiu primárnej diagnózy a 1 mesiac po predoperačnej chemoterapii a pri zvýšení pacientových hodnôt maximálnej intenzity autofluorescencie nádorového tkaniva o 15 % od počiatočnej a viac sa účinnosť liečby hodnotí ako čiastočná regresia nádorového procesu, pri absencii zmien intenzity autofluorescencie nádorového tkaniva od počiatočných, sa určí stabilizácia procesu, s poklesom intenzity autofluorescencie nádorového tkaniva o 15 %. a viac z počiatočnej poznámky progresie nádorového procesu.