Tanniinien määrällinen määritys tammenkuoresta. Laadullinen analyysi

Tanniinit ovat monimutkaisia ​​suurimolekyylisiä luonnollisia kasvifenoliyhdisteitä, jotka pystyvät saostamaan proteiineja ja alkaloideja ja parkittamaan raakaa eläimen ihoa ja muuttamaan siitä kestävän, lahoamatonta tuotetta - nahkaa.

Termin "tanniinit" otti käyttöön ranskalainen tiedemies P. Seguin vuonna 1796.

Tanniinit tai tanniinit ovat synonyymi termille "tanniinit". Se tulee latinalais-kelttiläisestä tammen nimityksestä - "tan" - ja sitä käytetään laajalti tieteellisessä kirjallisuudessa.

Näiden aineiden kyky "ruskettaa" eläinnahkojen proteiineja, tehdä niistä vettä läpäisemättömiä ja vastustuskykyisiä mikrobien hajoamista vastaan ​​perustuu niiden kykyyn olla vuorovaikutuksessa kollageenin kanssa, mikä johtaa pysyvien polymeerirakenteiden muodostumiseen. Parkitus on monimutkainen fysikaalinen ja kemiallinen prosessi, joka liittyy vety-, kovalenttisten ja elektrovalenttisten sidosten muodostumiseen kollageenimolekyylien ja tanniinien fenoliryhmien välille.

Vain polynukleaarisilla fenoleilla, jotka sisältävät useamman kuin yhden OH-ryhmän, on rusketusominaisuuksia. Nämä ovat suuria fenolisia molekyylejä, joiden molekyylipaino on 300 - 500 ja joskus jopa 20 000. Mononukleaariset fenolit, jotka eivät sisällä lukuisia OH-ryhmiä, adsorboituvat vain proteiineihin, mutta eivät voi muodostaa ristisidoksia itsensä ja proteiiniryhmien välille, "silloittaa" monomeeriproteiinia ryhmiä. Ne inaktivoivat entsymaattisia proteiineja jossain määrin, mutta eivät aiheuta fenoli-proteiini-liitoksia kollageenissa, ihon pääproteiinikomponentissa. Siksi pienimolekyylisillä fenoleilla on vain supistava maku, niitä kutsutaan myös ruoka- (teen) tanniineiksi.

Luokitus

Ensimmäisen yrityksen tanniinien luokittelua teki ruotsalainen kemisti I. Berzelius, joka jakoi nämä aineet kahteen ryhmään sen mukaan, miten ne pystyvät muodostamaan vihertävän tai sinertävän sävyn mustia yhdisteitä Fe (III) -suolojen kanssa. Myöhemmin tämä yksinkertainen tanniinien luokittelu muodosti perustan tarkemmalle tieteelliselle luokitukselle, jonka K. Freudenberg-
hom. Hän alkoi jakaa tanniinit kahteen ryhmään riippuen niiden kyvystä hydrolysoitua happojen (tai entsyymien) vaikutuksesta:

1) hydrolysoituvat tanniinit:

Gallotanniinit;

ellagitaniinit;

Karboksyylihappojen depsidit tai ei-sokeriesterit;

2) ei-hydrolysoituvat (kondensoituneet) tanniinit eli flobafeenit, jotka on jaettu johdannaisiin:

katekiinit (flavan-3-olit);

Leukoantosyanidiinit (flavani-3,4-diolit);

Hydrostilbeenit.

hydrolysoituvat tanniinit. Gallotanniinit ovat heksoosien (yleensä D-glukoosin) ja gallushapon estereitä. Glukoosissa on viisi OH-ryhmää, joiden ansiosta voi muodostua mono-, di-, tri-, tetra-, penta- ja polygalloyylieettereitä. Polygalloyylieettereiden ryhmän edustaja on kiinalainen tanniini, jota saadaan puolisiipisen sumakin (Rhus semialata Murr.) lehdistä ja niihin muodostuneista kasvaimista (sappeista). Polygalloyylieettereiden edustaja on raparperin juuresta ja eukalyptuksen lehdistä eristetty P-D-glukogalliini.

Ellagotaniinit ovat D-glukoosin ja heksadifenoli-, hebuliini- ja muiden happojen estereitä, joita muodostuu yhdessä ellagiinihapon kanssa. Ellagotanniineja löytyy granaattiomenan hedelmäkuoresta, pähkinänkuoresta, tammenkuoresta ja leppätaimista. Kasvit eivät yleensä sisällä ellagiinihappoa, vaan heksahydroksidifeenihappoa.

Tanniinien happohydrolyysin aikana tämä happo muuttuu dilaktoniksi - ellagiinihapoksi.

Depsidit ovat gallushapon estereitä kiniini-, kloro-, kofeiini-, hydroksikanelihapon ja myös flavanien kanssa. Gallushapon ja katekiinien estereitä löytyy teelehdistä. Teogalliini on eristetty vihreän teen lehdistä.

Theogallin (depsid)

Pääosin hydrolysoituvat tanniinit sisältävät sellaisia ​​LR:itä, kuten parkitustehdas, parkitussumakki, käärme vuorikiipeilijä, paksulehtinen bergenia, officinalis burnet, leppä ja o. harmaa.

Pääosin tiivistyneet tanniinit sisältävät tammea, pystysuoria, mustikkaa, lintukirsikkaa.

Hydrolysoitumattomat tanniinit. Ne ovat katekiinien, leukoantosyanidiinien ja hydroksitilbeenien oligomeerejä ja polymeerejä, joissa yksiköt on liitetty toisiinsa vahvoilla hiili-hiilisidoksilla asemissa C2-C6, C2-C8, C4-C8, C5-C2. Lisäksi ne eivät koskaan sisällä sokerijäämiä.

Kondensoituneiden tanniinien muodostumisen aikana katekiinin (leukoantosyanidiini) pyraanirengas rikkoutuu ja C2-atomi yhdistyy C-C-sidoksella toisen katekiinimolekyylin (leukoantosyanidiini) C6-atomiin. Kondensoituneet tanniinit eivät hajoa happojen vaikutuksesta; päinvastoin, niillä on taipumus muuttua oligomeereistä pidemmiksi polymeereiksi (happopolymerointi) muodostaen amorfisia, usein punaisia ​​yhdisteitä - flobafeenia. Kondensoituneiden tanniinien muodostuminen tapahtuu elävässä kasvissa biosynteesiprosessissa ja sen kuoleman jälkeen - puun teknologisen käsittelyn aikana.

Kondensoituneiden tanniinien muodostuminen monomeereistä

Fysiokemialliset ominaisuudet

Fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksiensa mukaan tanniinit ovat amorfisia yhdisteitä, joiden väri on kellertävä tai ruskea.

Luonnollisten tanniinien keskimääräinen molekyylipaino on 500-5000, mutta yksittäisten yhdisteiden - jopa 20 000. Kuumennettaessa 180-200 ° C:seen tanniinit (ilman sulamista) hiiltyvät ja vapauttavat pyrogallolia tai pyrokatekolia. Ne liukenevat moniin orgaanisiin liuottimiin (asetoni, etanoli, etyyliasetaatti, pyridiini), mutta eivät kloroformiin, petrolieetteriin, bentseeniin. Liukenee myös hyvin veteen, mieluiten kuumana. Veteen liuotettuna ne antavat heikosti happaman reaktion kolloidisia liuoksia. Ne muodostavat värillisiä komplekseja raskasmetallisuolojen kanssa. Saostuu aminohappojen, proteiinien, alkaloidien liuoksilla. Monet tanniinit ovat optisesti aktiivisia yhdisteitä. Niillä on supistava maku. Hapeutuu helposti ilmassa, saaden punaruskean värin, joskus tummanruskean. Alkalimetallihydroksidien läsnäolo nopeuttaa suuresti tanniinien hapettumista. Hydrolysoituvat tanniinit hajoavat orgaanisiksi hapoiksi ja glukoosiksi happojen tai entsyymien vaikutuksesta.

Eristys VRS:stä

Tanniinit ovat sekoitus erilaisia ​​polyfenoleja, joilla on monimutkainen rakenne, erittäin labiileja, joten tanniinien yksittäisten komponenttien eristäminen ja analysointi on erittäin vaikeaa. Tanniinien määrän saamiseksi kasviperäiset raaka-aineet uutetaan kuumalla vedellä, jäähdytetään ja sitten uute käsitellään peräkkäin:

1) petrolieetteri tai bentseeni (puhdistukseen klorofyllistä, terpenoideista, lipideistä);

2) dietyylieetteri, joka uuttaa katekiinit, hydroksikanelihapot ja muut fenoliyhdisteet;

3) etyyliasetaatti, johon leukoantosyanidiinit, hydroksikanelihapon esterit jne. kulkeutuvat.

Jäljelle jäänyt vesiuute tanniineilla ja muilla fenoliyhdisteillä sekä fraktioilla 2 ja 3 (dietyylieetteri ja etyyliasetaatti) erotetaan yksittäisiksi komponenteiksi käyttämällä erilaisia ​​kromatografioita. Käyttää:

Adsorptiokromatografia selluloosa-, polyamidipylväissä (joskus polyamidin sijasta käytetään gole-jauhetta);

Partitiokromatografia silikageelipylväissä;

Ioninvaihtokromatografia;

Geelisuodatus Sephadex-kolonneilla jne.

Yksittäisten tanniinien tunnistaminen perustuu Rf:n vertailuun kromatografisissa menetelmissä (paperilla, ohuessa sorbenttikerroksessa), spektritutkimuksissa, kvalitatiivisissa reaktioissa ja hajoamistuotteiden tutkimuksessa (hydrolysoituvien tanniinien osalta).

Tanniinien laadullinen uuttaminen

Kvalitatiiviset reaktiot tanniinien määrittämiseksi voidaan jakaa kahteen ryhmään:

1) yleinen (laskeuma) - tanniinien esiintymisen havaitsemiseksi;

2) ryhmä (väri) - tanniinien kuuluvuuden määrittäminen tiettyyn ryhmään.

Ensinnäkin kvalitatiivisten reaktioiden suorittamiseksi valmistetaan tanniinien vesiuutto VP:stä.

Tanniinit havaitaan seuraavilla reaktioilla:

Yhdistäminen 1 % gelatiiniliuokseen 10 % NaCl-liuoksessa. Sameus ilmaantuu ja häviää, kun liiallinen gelatiini lisätään. Reaktio on spesifinen;

Saostaminen alkaloidien suoloilla (esimerkiksi kiniinisulfaatilla). Muodostuu valkoinen sakka;

Yhdistetään 5-prosenttiseen kaliumdikromaattiliuokseen (K2Cr2O7). Muodostuu ruskea sakka tai samea. Samaa reaktiota käytetään myös histokemiallisena reaktiona tanniinien paikallistamisen havaitsemiseksi VP:ssä;

Yhdistäminen emäksisen lyijyasetaattiliuoksen kanssa: muodostuu valkoinen sakka;

Yhdessä vanilliinin kanssa (70 % rikkihapon tai väkevän suolahapon läsnä ollessa) katekiinityyppisiä monomeerejä sisältävät tanniinit kehittävät punaisen värin.

Tanniinien luokitus suoritetaan käyttämällä seuraavia reaktioita:

1-prosenttisella rautaammoniumalunaliuoksella (tai muilla Fe3 + -ionien lähteillä): hydrolysoituvat tanniinit antavat musta-sinisen värin ja kondensoituneet - musta-vihreä;

Keskipitkän lyijyasetaatin 10-prosenttisella liuoksella 10-prosenttisessa etikkahapossa: hydrolysoituvat tanniinit saostuvat valkoiseksi flokkuloivaksi sakaksi, kun taas kondensoituneet tanniinit jäävät liuokseen ja ne voidaan myös myöhemmin tunnistaa (esimerkiksi vihertävän mustalla värjäyksellä Fe3+:lla);

40 % formaldehydiliuoksen ja väkevän HCl:n seoksella: kondensoituneet tanniinit saostuvat, kun taas hydrolysoituvat jäävät vesiliuokseen (joka voidaan tunnistaa sinertävän mustan värin perusteella lisätestissä Fe3+:lla);

NaNO2-kiteillä ja 0,1 M HCl-liuoksella: tanniinien läsnä ollessa VP-uutteessa ilmaantuu ruskea väri;

HCl-liuoksella ja 1-prosenttisen vanilliiniliuoksen (tai kiteiden) lisäyksellä katekiinimonomeereistä koostuvat hydrolysoituvat tanniinit antavat kuumennettaessa kirkkaan punaisen värin. Hydrolysoituvat tanniinit, jotka koostuvat leukoantosyanidiinimonomeereistä, voidaan havaita kuumentamalla uutetta HCl-liuoksella: ilmestyy punainen väri (johtuen antosyanidiinien muodostumisesta, jotka antavat punaisen värin happamissa pH-arvoissa);

Kun bromivettä lisätään ja kuumennetaan, VP:n uutteessa olevat kondensoituneet tanniinit saostuvat ulos.

Tanniinien kromatografisessa määrityksessä VP:stä saatu etanoliuute levitetään Silufol-kromatografisen levyn aloitusviivalle, sijoitetaan kromatografiakammioon (asianmukaisten liuottimien kanssa, jotka on määritelty ND:ssä), ja erotuksen jälkeen levyä tarkastellaan UV-valoa ja on huomattava, että joillakin katekiinijohdannaisilla on sininen fluoresenssi, jota tehostetaan käsittelemällä kromatogrammeja 1-prosenttisella vanilliiniliuoksella väkevässä HCl:ssä. Kun kromatogrammeja on pidetty HCl-höyryssä ja kuumennettu uunissa 105 °C:ssa 2 minuuttia, leukoantosyanidiinityyppiset tanniinit muuttuvat vaaleanpunaisiksi tai punavioletteiksi antosyanidiineiksi.

Tanniinien kvantifiointi

VP:n tanniinien kvantitatiivisen määritysmenetelmät voidaan jakaa gravimetrisiin, titrimetrisiin ja fysikaalis-kemiallisiin.

Gravimetriset menetelmät perustuvat tanniinien kvantitatiiviseen saostukseen raskasmetallisuoloilla, gelatiinilla tai adsorptioon hollyjauheella. Menetelmät tanniinien saostamiseksi kupariasetaatilla tai gelatiinilla ovat menettäneet merkityksensä.

Nahkateollisuudessa käytetään kuitenkin yhtenäistä painomenetelmää (BEM). Menetelmä perustuu tanniinien kykyyn muodostaa vahvoja sidoksia ihon kollageenin kanssa. Tätä varten MPC:stä saatu vesiuute jaetaan kahteen yhtä suureen osaan. Yksi osa haihdutetaan, kuivataan ja punnitaan; toinen käsitellään iho- (iho)jauheella, suodatetaan. Suodos haihdutetaan, kuivataan ja punnitaan. 1. ja 2. osan kuivien jäännösten ero (eli kontrolli ja kokemus) määrää liuoksen tanniinipitoisuuden.

SP RB:n (numero 2, s. 348) sisältämä titrimetrinen menetelmä, jota kutsutaan Leventhal-Neubauerin menetelmäksi, perustuu fenolisten OH-ryhmien hapetukseen kaliumpermanganaatilla (MnO4) indigosulfonihapon läsnäollessa, joka on säädin ja reaktion indikaattori. Tanniinien täydellisen hapettumisen jälkeen indigosulfonihappo alkaa hapettua isatiiniksi, minkä seurauksena liuoksen väri muuttuu sinisestä kullankeltaiseksi.

Toinen titrimetrinen menetelmä tanniinien määrittämiseksi on tanniinin saostusmenetelmä sinkkisulfaatilla, jota seuraa kompleksometrinen titraus Trilon B:llä ksyleenioranssin läsnä ollessa (käytetään erityisesti tanniinin määrittämiseen tanniinisen sumakin ja parkitustehtaan lehdistä ).

Fysikaaliset ja kemialliset menetelmät tanniinien määrittämiseksi:

Kolorimetrinen - liittyy tanniinien kykyyn antaa värillisiä yhdisteitä fosfori-molybdiini- tai fosfori-volframihappojen kanssa Na2CO3:n läsnä ollessa tai Folin-Denis-reagenssin kanssa (fenoleille). SP RB (osa 1; 2.8.14) ehdottaa VP:stä vesiliuokseen uutettujen tanniinien fotokolorimetristä määritystä fosfori-molybdeenireagenssiliuoksella natriumkarbonaatin läsnä ollessa aallonpituudella 760 nm;

Kromatospektrofotometriset ja nefelometriset menetelmät, joita käytetään pääasiassa tieteellisessä tutkimuksessa.

Kasvimaailmassa leviäminen, muodostumisolosuhteet ja rooli kasveissa

Tanniinit ovat laajalle levinneitä kasvikunnassa. Niitä löytyy sienistä, levistä, saniaisista, korteista, sammalista, mailasammalista ja korkeammista kasveista (angiosiemeniset ja sinisiemeniset). Monet havupuut keräävät melko paljon tanniineja. Niiden suurin kertymä havaittiin kaksisirkkaisten kasvien yksittäisillä edustajilla, kun taas yksisirkkaisissa se havaittiin vain joissakin perheissä. Vähäinen tanniinipitoisuus viljassa. Kaksisirkkaisissa perheissä (esimerkiksi ruusufinnit, tattari, palkokasvit, pajut, sumakki, pyökki, kanerva) kuuluu monia sukuja ja lajeja, joissa tanniinipitoisuus on 20-30 % tai enemmän. Korkein tanniinipitoisuus löydettiin patologisista muodostelmista - sappeista (jopa 60-80%). Puumaiset muodot ovat tanniinirikkaampia kuin ruohomaiset. Tanniinit jakautuvat epätasaisesti kasvien elimiin ja kudoksiin. Ne kerääntyvät pääasiassa puiden ja pensaiden kuoreen ja puuhun sekä nurmikasvien perennojen maanalaisiin osiin; kasvin vihreät osat ovat paljon vähemmän tanniineja. Erityisesti tanniinit kerääntyvät:

Maanalaisissa elimissä (Potentilla erectus, Burnet officinalis, Badan paksulehtinen);

Kore (tammi);

Ruoho (mäkikuismatyypit);

Hedelmät (tavallinen mustikka, lintukirsikka, tahmea leppä ja

noin. harmaa);

Lehdet (ruskettava sumakki, nahka skumpia).

Tanniinit kerääntyvät tyhjiin, ja solujen ikääntyessä ne adsorboituvat soluseiniin. Useimmiten kasveissa on hydrolysoituvien ja kondensoituneiden tanniinien seos, jossa vallitsee jonkin ryhmän yhdisteet.

Tanniinipitoisuus kasveissa vaihtelee kasvukauden ja kasvien iän mukaan. Niiden kertymiseen liittyy samanaikaisesti juurijärjestelmän massan voimakas kasvu. Kasvien iän myötä tanniinien määrä niissä vähenee. Kasvukausi ei vaikuta vain tanniinien määrälliseen, vaan myös laadulliseen koostumukseen.

Auringossa kasvavat kasvit keräävät enemmän tanniineja kuin varjossa kasvavat (esimerkiksi trooppisissa kasveissa niitä muodostuu paljon enemmän kuin lauhkeiden leveysasteiden kasveissa). Kasvien tanniinipitoisuuteen vaikuttavat myös korkeus merenpinnasta, vuodenaika - erityisesti alueilla, joilla on voimakas kausi-ilmasto. Tanniinien pitoisuus riippuu sekä ilmasto-, maaperä- että geneettisistä (perinnöllisistä) kasvitekijöistä.

On todettu, että suurin osa lehtien tanniineista sijaitsee suonen ympärillä olevissa parenkyymisoluissa, eli tanniinit muodostuvat lehdissä ja siirtyvät sieltä johtavien kimppujen floemisoluihin, joiden läpi ne kulkeutuvat kauttaaltaan. kasvi. Niillä on bakterisidisiä ominaisuuksia (fenolisen luonteensa vuoksi), ne estävät puun lahoamista ja ovat aineita, jotka suojaavat kasveja tuholaisilta ja taudinaiheuttajilta. Tanniinit osallistuvat myös kasvien aineenvaihduntaprosesseihin. Ne talletetaan varatuotteina, joita voidaan sitten käyttää kevään heräämisen ja kasvuelinten kasvun aikana.

Biolääketieteen toiminta ja sovellus

Tanniineja ja niitä sisältäviä LR:ää käytetään pääasiassa supistavina, tulehdusta ehkäisevinä ja hemostaattisina aineina.

Tanniiniliuokset sitoutuvat ihon proteiineihin muodostaen vettä läpäisemättömän kalvon. Niiden lääketieteellinen käyttö supistavina aineina perustuu tähän, koska limakalvoille muodostunut kalvo estää tulehduksen lisäämistä ja haavaan levitettynä ne koaguloivat verta ja toimivat siten paikallisina hemostaattisina aineina. Ominaisuus muodostaa kalvo kielelle määrää tanniinien ominaisen supistavan maun.

Supistavina aineina;

Hemostaattiset aineet;

Tulehduskipulääkkeet;

Antimikrobiset aineet;

ja myös näin:

P-vitamiini ja antiskleroottiset aineet (hydrolysoituvat ja kondensoidut tanniinit);

Antioksidantit ja hypooksantit (kondensoidut tanniinit);

Kasvainten vastaiset aineet (tiivistyneet tanniinit);

Vastalääkkeet myrkytykseen glykosideilla, alkaloideilla ja raskasmetallisuoloilla (tanniinit).

On osoitettu, että suurilla tanniiniannoksilla on kasvaimia estävä, keskisuurilla annoksilla säteilyä herkistävä ja pienillä annoksilla säteilyä estävä vaikutus.

Tanniineja käytetään laajalti myös nahka-, konjakki- ja elintarviketeollisuudessa.

Tanniineja sisältävän VP:n korjuu

Sadonkorjuu suoritetaan tanniinien enimmäispitoisuuden aikana. Kuivuu nopeasti 50-60 °C:n lämpötilassa, koska tuoreiden raaka-aineiden pitkäaikainen varastointi johtaa hydrolysoituvien ja kondensoituneiden tanniinien hydrolyyttiseen pilkkoutumiseen entsyymien vaikutuksesta. Kuivattu VP säilytetään kokonaisena kuivassa paikassa pakattuna. Murskatun VP:n varastoinnin aikana tanniinien hapettumisnopeus kasvaa ja väri muuttuu.

text_fields

text_fields

nuoli_ylöspäin

Tanniinit (tanniinit) - nämä ovat monimutkaisia ​​fenoliyhdisteiden kasviperäisten korkeamolekyylisten polymeerien seoksia, joiden molekyylipaino on 300-5000 (noin 500-3000), makua supistava ja jotka kykenevät muodostamaan vahvoja sidoksia proteiineihin ja muuttamaan raa'an eläimen nahan parkituksi nahaksi.

Parkitusprosessin ydin on vahvojen vetysidosten muodostuminen tanniinien fenolisten hydroksyylien ja kollageeniproteiinimolekyylien välille. Tuloksena on vahva ristisilloitettu rakenne - iho, joka kestää lämpöä, kosteutta, mikro-organismeja, entsyymejä, ts. ei mätä.

Polyfenoliyhdisteet, joiden molekyylipaino on pienempi (alle 300), adsorboituvat vain proteiineihin, mutta eivät pysty muodostamaan pysyviä komplekseja, eikä niitä käytetä parkitusaineina. Suuren molekyylipainon omaavat polyfenolit (molekyylipainoltaan yli 5000) eivät myöskään ole parkitusaineita, koska niiden molekyylit ovat liian suuria eivätkä tunkeudu kollageenifibrillien väliin.

Siten tärkein ero tanniinien ja muiden polyfenoliyhdisteiden välillä on kyky muodostaa vahvoja vetysidoksia proteiinien kanssa.

Ranskalainen tiedemies Seguin käytti termiä "tanniinit" ensimmäisen kerran vuonna 1796 viittaamaan tiettyjen kasvien uutteissa oleviin aineisiin, jotka voivat suorittaa parkitusprosessin. Toinen tanniinien nimi - "tanniinit" tulee tammen kelttiläisen nimen latinaistetusta muodosta - " rusketus”, jonka kuorta on käytetty pitkään nahan käsittelyyn.

Ensimmäinen tieteellinen tutkimus tanniinikemian alalla juontaa juurensa 1700-luvun jälkipuoliskolta. Ne johtuivat nahkateollisuuden käytännön tarpeista. Ensimmäinen julkaistu teos on Gledichin (1754) teos "Mustikoiden käytöstä tanniinien tuotannon raaka-aineena". Ensimmäinen monografia oli Dekkerin vuonna 1913 julkaistu monografia, joka tiivisti kaiken tanniineista kertyneen materiaalin. Tanniinien etsinnän, eristämisen ja rakenteen määrittämisen suorittivat kotimaiset tutkijat L.F. Ilyin, A.L. Kursanov, M.N. Zaprometov, F.M. Flavitsky, G. Povarnin, A.I. Oparin ja muut; ulkomaiset tutkijat G. Procter, K. Freidenberg, E. Fischer, P. Karrer ja muut.

Jakelu kasvimaailmassa

text_fields

text_fields

nuoli_ylöspäin

Tanniinit ovat laajalle levinneitä villieläimissä. Niitä löytyy pääasiassa kasveista, mutta niitä löytyy myös levistä, sienistä ja jäkäläistä. Yleisimmät tanniinit kaksisirkkaisten edustajien keskuudessa, joihin niitä kertyy suurina määrinä. Yksisirkkaiset eivät yleensä sisällä tanniineja, tanniinit löytyvät saniaisista, ja korteissa, sammalissa, sammalsammaleissa niitä ei käytännössä ole tai niitä on vähän.

Perheet, joissa on korkein tanniinipitoisuus, ovat:

• sumakki - Anacardiaceae (ruskettava sumakki, nahka skumpia);
• ruusupunainen - Rosaceae (burnet officinalis, cinquefoil pystyssä);
• pyökki - Fagaceae (tavallinen tammi (k. kantainen) ja d. kivinen);
• tattari - Polygonaceae (iso serpentiini ja z. liha-punainen);
• kanerva - Ericaceae (karhunmarja, puolukka);
• koivu - Betulaceae (harmaa leppä ja o. tahmea) jne.

Kasvien rooli

text_fields

text_fields

nuoli_ylöspäin

Kasvien biologista roolia ei ole täysin selvitetty. On olemassa useita hypoteeseja:

1. tanniinit - kasviorganismien elintärkeän toiminnan jätetuotteet;
2. tanniinit ovat yksi vararavinteiden muoto. Tämän osoittaa niiden sijainti maanalaisissa elimissa ja aivokuoressa;
3. tanniinit suorittavat suojaavan toiminnon, tk. kun kasvit vaurioituvat, ne muodostavat komplekseja proteiinien kanssa, jotka muodostavat suojakalvon, joka estää fytopatogeenisten organismien tunkeutumisen. Niillä on bakterisidisiä ja fungisidisia ominaisuuksia;
4. tanniinit osallistuvat redox-prosesseihin, ovat hapen kantajia kasveissa.

Tanniinien biosynteesi, lokalisointi ja kertyminen kasveihin

text_fields

text_fields

nuoli_ylöspäin

Hydrolysoituvien tanniinien biosynteesi etenee shikimaattireittiä pitkin, kondensoituneet tanniinit muodostuvat sekareittiä pitkin (shikimaatti ja asetaatti-malonaatti).

Tanniinit ovat liuenneessa tilassa kasvisolujen tyhjiöissä, solujen ikääntyessä ne adsorboituvat soluseiniin. Ne sijaitsevat orvaskeden soluissa, verisuonikimppuja (lehtisuonet) ympäröivissä parietaalisoluissa, ydinsäteiden parenkymaalisissa soluissa, kuoressa, puussa ja floeemissa.

Tanniinit kerääntyvät suuria määriä pääasiassa monivuotisten ruohomaisten kasvien maanalaisiin elimiin (bergenian juurakot, käärme, cinquefoil, juurakot ja juuret), puiden ja pensaiden kuoreen ja puuhun (tammen kuori, viburnum), hedelmiin ( lintukirsikan hedelmät, mustikat, leppätaimet), harvemmin lehdissä (skumpian lehdet, sumakki, tee).

Tanniinien kertyminen riippuu geneettisistä tekijöistä, ilmasto- ja ympäristöolosuhteista. Ruohokasveissa tanniinien vähimmäismäärä havaitaan pääsääntöisesti keväällä versojen kasvun aikana, sitten niiden pitoisuus kasvaa ja saavuttaa maksiminsa orastumisen ja kukinnan aikana (esimerkiksi Potentilla-juurikat). Kasvukauden loppuun mennessä tanniinien määrä vähenee vähitellen. Burnetissa tanniinien maksimi kerääntyy ruusukelehtien kehitysvaiheessa, kukintavaiheessa niiden pitoisuus vähenee ja syksyllä taas kasvaa. Kasvillisuusvaihe ei vaikuta ainoastaan ​​tanniinien määrään, vaan myös laadulliseen koostumukseen. Keväällä puiden ja pensaiden kuoressa tapahtuvan mahlan virtauksen aikana sekä ruohokasveissa versojen uudelleenkasvuvaiheessa kerääntyvät pääasiassa hydrolysoituvat tanniinit ja syksyllä kasvien kuolemisen vaiheessa kondensoituneet tanniinit ja niiden polymeroitumistuotteet. , flobafeenit (punaiset).

Tanniinien kertymiselle suotuisimmat olosuhteet ovat lauhkean ilmaston olosuhteet (metsävyöhyke ja korkean vuoriston alppivyöhyke).

Suurin tanniinipitoisuus havaittiin tiheällä kalkkipitoisella maaperällä kasvavissa kasveissa, löysällä chernozem- ja hiekkamaalla niiden pitoisuus on pienempi. Fosforipitoinen maaperä edistää tanniinien kertymistä, typpipitoinen maaperä vähentää tanniinipitoisuutta.

Tanniineja sisältävien raaka-aineiden sadonkorjuu, kuivaus ja varastointi

text_fields

text_fields

nuoli_ylöspäin

Tanniineja sisältävien lääkekasvimateriaalien sadonkorjuu tapahtuu yleisten sääntöjen mukaisesti. Sääntöön on kuitenkin joitain poikkeuksia:

• Potentilla-juurakot korjataan kesällä kukinnan aikana, koska. tiivistyneiden tanniinien pitoisuus niissä on melko suuri, ja niissä on myös otettu huomioon se, että kasvin kukinnan ja sen ilmaosan kuihtumisen jälkeen syksyllä on lähes mahdotonta havaita kinkkua suoisen ruohosta. paikat;
• kelan juurakot kaivetaan heti kasvin kukinnan jälkeen;
• polven juurakot ja juuret on kaivettava esiin hedelmäkauden aikana, jolloin tummanpunaiset kukinnot ovat helposti näkyvissä ruohoissa;
• leppien taimet korjataan myöhään syksyllä tai talvella, jolloin lehdet eivät häiritse.

Kuivaa kerätyt raaka-aineet kuivaimissa enintään 60 ºС (40-60 ºС) lämpötilassa. Luonnollisella kuivauksella raaka-aineet levitetään ohueksi kerrokseksi ulkoilmaan tai suljetussa tuuletetussa tilassa.

Raaka-aineet voidaan kuivata auringossa, koska. tanniinit eivät hajoa ultraviolettisäteiden vaikutuksesta.

Tanniineja sisältävien raaka-aineiden tulee olla yleisten sääntöjen mukaisia. Lintukirsikka- ja mustikkahedelmät varastoidaan erikseen muiden hedelmien kanssa. Lepvän taimet varastoidaan yhdessä kaikenlaisten raaka-aineiden kanssa, koska. taimet ovat puumaisia ​​eivätkä, kuten kokemus on osoittanut, vaurioita viljakasvien tuholaisilta.

Fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet

text_fields

text_fields

nuoli_ylöspäin

Tanniinit eristetään kasviraaka-aineista polymeeriseoksen muodossa ja ovat amorfisia aineita, joiden väri on keltainen tai kellanruskea, hajuton, supistava maku, erittäin hygroskooppinen. Ne liukenevat hyvin veteen (erityisesti kuumaan veteen) muodostaen kolloidisia liuoksia; ne liukenevat myös etyyli- ja metyylialkoholeihin, asetoniin, etyyliasetaattiin, butanoliin, pyridiiniin. Ei liukene kloroformiin, bentseeniin, dietyylieetteriin ja muihin ei-polaarisiin liuottimiin, optisesti aktiivinen.

Hapeutuu helposti ilmassa. Pystyy muodostamaan vahvoja molekyylien välisiä sidoksia proteiinien ja muiden polymeerien kanssa (pektiiniaineet, selluloosa jne.). Entsyymien ja happojen vaikutuksesta hydrolysoituvat tanniinit hajoavat aineosiksi, kondensoituneet tanniinit polymeroituvat.

Gelatiinin, alkaloidien, lyijyasetaatin, kaliumdikromaatin, kardiotonisten glykosidien saostamista vesiliuoksista.

Fenolisina aineina tanniinit hapettavat helposti kaliumpermanganaatin ja muiden hapettimien vaikutuksesta happamassa ympäristössä, muodostavat värillisiä komplekseja raskasmetallisuolojen, rautaraudan ja bromiveden kanssa.

Imeytyy helposti ihojauheeseen, selluloosaan, puuvillaan.

Tanniineja sisältävien raaka-aineiden analyysi

text_fields

text_fields

nuoli_ylöspäin

Tanniinien määrän saamiseksi kasviraaka-aineet uutetaan kuumalla vedellä suhteessa 1:30 tai 1:10.

Laadullinen analyysi

Käytetään kvalitatiivisia reaktioita (saostus ja väri) ja kromatografista tutkimusta.

minä Yleiset saostumisreaktiot– tanniinien havaitsemiseksi raaka-aineista:

1. Erityinen reaktio on gelatiinin saostusreaktio, jossa käytetään 1-prosenttista gelatiiniliuosta 10-prosenttisessa natriumkloridiliuoksessa. Ilmenee flokkuloiva sakka tai sameus, joka katoaa, kun liiallinen gelatiini lisätään. Negatiivinen reaktio gelatiinin kanssa osoittaa tanniinien puuttumisen.
2. Reaktio alkaloidien suolojen kanssa käyttäen 1-prosenttista kiniinikloridiliuosta. Amorfinen sakka syntyy, koska tanniinien hydroksyyliryhmien ja alkaloidin typpiatomien välille muodostuu vetysidoksia.

Nämä reaktiot antavat saman vaikutuksen tanniiniryhmästä riippumatta. Useiden reaktioiden avulla voidaan määrittää, kuuluvatko tanniinit tiettyyn ryhmään.

II. Ryhmä laadullisia reaktioita tanniineille:

№	Reagenssi	Hydrolysoituvat tanniinit	Tiivistetyt tanniinit
1	laimennettua rikkihappoa	hydrolyysi	punaruskea flobafeeni (kraseni)
2	bromivesi (5 g bromia 1 litrassa vettä)	———	oranssi tai keltainen sakka
3	1-prosenttinen rautaammoniumalunaliuos (rautaoksidikloridia ei käytetä, koska sen liuoksella on hapan reaktio)	musta-sininen väri tai sedimentti	musta-vihreä väri tai sedimentti
4	10 % liuos lyijyväliaineasetaattia (lisää samanaikaisesti 10 % etikkahappoliuosta)	valkoinen sakka, etikkahappoon liukenematon (sakka suodatetaan pois ja kondensoituneiden tanniinien pitoisuus määritetään suodoksesta 1-prosenttisella rautaammoniumalunaliuoksella - musta-vihreä väritys)	valkoinen sakka, liukenee etikkahappoon
5	Stiasni-testi (40 % formaldehydiliuos väkevällä kloorivetyhapolla)	———	tiilenpunainen sakka (sakka suodatetaan pois ja hydrolysoituvien tanniinien pitoisuus määritetään suodoksesta, neutraalissa väliaineessa 1-prosenttisella rautaammoniumalunaliuoksella - musta-sininen väritys)
6	1 % vanilliiniliuos väkevässä suolahapossa	———	oranssinpunainen värjäys (katekiinit)

Reaktio 1-prosenttisella rautaammoniumaluna-alkoholiliuoksella sisältyy kaikkiin lääkeraaka-aineita koskeviin asiakirjoihin reaktiona niiden aitouden määrittämiseksi. GF XI suosittelee reaktiota, ja se suoritetaan sekä raaka-ainekeittimellä (tammenkuori, käärmejuuret, leppien taimet, mustikat) että tanniinien avaamiseksi suoraan kuivissa raaka-aineissa (tammenkuori, viburnum-kuori, bergenian juurakot) .

kvantifiointi

Tanniinien kvantitatiiviseen määritykseen on olemassa noin 100 erilaista menetelmää, jotka voidaan jakaa seuraaviin pääryhmiin.

1. gravimetrinen, tai painon mukaan menetelmiä- perustuu tanniinien kvantitatiiviseen saostumiseen gelatiinilla, raskasmetalli-ioneilla tai ihon (paljaan) jauheen adsorptioon.

Teknisistä syistä gravimetrinen menetelmä, jossa käytetään hollajauhetta - painotettu yhtenäinen menetelmä (BEM) on standardi kaikkialla maailmassa.

Tanniinien vesiuute jaetaan kahteen yhtä suureen osaan. Yksi osa uutteesta haihdutetaan ja kuivataan vakiopainoon. Toinen osa uutteesta käsitellään ihojauheella ja suodatetaan. Tanniinit imeytyvät nahkajauheeseen ja jäävät suodattimeen. Suodos ja pesuvedet haihdutetaan ja kuivataan vakiopainoon. Tanniinipitoisuus lasketaan kuivien jäämien massaerosta.

Menetelmä on epätarkka, koska ihojauhe myös adsorboi pienimolekyylipainoisia fenoliyhdisteitä, mikä on melko työlästä ja kallista.

1. Titrimetrinen menetelmiä. Nämä sisältävät:

a) Hyytelömäinen menetelmä- perustuu tanniinien kykyyn muodostaa liukenemattomia komplekseja proteiinien kanssa. Raaka-aineista saadut vesiuutteet titrataan 1-prosenttisella gelatiiniliuoksella; ekvivalenttipisteessä gelatiinitannaattikompleksit liukenevat ylimäärään reagenssia. Tiitterin määrää puhdas tanniini. Vastaavuuspiste määritetään valitsemalla pienin tilavuus titrattua liuosta, joka aiheuttaa tanniinien täydellisen saostumisen.

Menetelmä on tarkin, koska voit määrittää todellisten tanniinien määrän. Haitat: määritelmän pituus ja vastaavuuspisteen määrittämisen vaikeus.

b) Permanganometrinen menetelmä(Leventhal-Neubauerin menetelmä, jota A. L. Kursanov modifioi). Tämä farmakopean menetelmä perustuu tanniinien helppoon hapettumiseen kaliumpermanganaatilla happamassa väliaineessa indikaattorin ja indigosulfonihapon katalyytin läsnä ollessa, joka ekvivalenssipisteessä muuttuu isatiiniksi ja liuoksen väri muuttuu sinisestä. kullankeltaiseksi.

Määrityksen ominaisuudet, jotka mahdollistavat vain tanniinien makromolekyylien titrauksen: titraus suoritetaan voimakkaasti laimennetuissa liuoksissa (uutto laimennetaan 20 kertaa) huoneenlämpötilassa happamassa väliaineessa, kaliumpermanganaattia lisätään hitaasti, tipoittain, voimakkaasti sekoittaen.

Menetelmä on taloudellinen, nopea, helppo suorittaa, mutta ei tarpeeksi tarkka, koska kaliumpermanganaatti hapettaa osittain pienimolekyylipainoisia fenoliyhdisteitä.

1. Fysikaalis-kemiallinen menetelmiä.

a) Valoelektrokolorimetrinen menetelmät perustuvat tanniinien kykyyn muodostaa värillisiä yhdisteitä rautasuolojen, fosfori-volframihapon, Folin-Denis-reagenssin jne. kanssa.

b) Kromatospektrofotometrinen ja nefelometrinen menetelmiä käytetään tieteellisessä tutkimuksessa.

Raaka-aineiden käyttötavat, lääketieteelliset sovellukset, valmisteet

text_fields

text_fields

nuoli_ylöspäin

Lääkinnällisen tanniinin teollisen tuotannon lähteiden lisäksi kaikki tutkittavat kohteet sisältyvät 18. maaliskuuta 1997 päivättyyn tilaukseen nro 79, joka sallii apteekkien raaka-aineiden ilman reseptiä myynnin.

Äärimmäisissä resepteissä ja kotona raaka-aineita käytetään keittämisenä ja osana maksuja.

Yrttivalmisteita ei valmisteta (nestemäiset bergenian juurakot ja poltetut juurakot ja juuret ovat tällä hetkellä valtion rekisterin ulkopuolelle).

Tanniini ja yhdistelmävalmisteet "Tanalbin" (tanniinikompleksi kaseiiniproteiinin kanssa) ja "Tansal" (tanalbiinikompleksi fenyylisalisylaatin kanssa) saadaan parkitustanniinin, sumakin, kiinalaisen ja turkkilaisen sapen lehdistä. Lepvän taimista saatiin lääke "Altan".

Käytetään tanniineja sisältäviä raaka-aineita ja valmisteita ulospäin ja sisäisesti

• supistavat aineet,
• tulehdusta estävä,
• bakterisidinen ja
• hemostaattiset aineet.

Toimintaan perustuva tanniinien kyvystä sitoutua proteiineihin muodostamalla tiheitä albuminaatteja. Tulehtunutta limakalvoa tai haavan pintaa koskettaessa muodostuu ohut pintakalvo, joka suojaa herkkiä hermopäätteitä ärsytykseltä. Solukalvot sulkeutuvat, verisuonet kapenevat, eritteiden vapautuminen vähenee, mikä johtaa tulehdusprosessin vähenemiseen.

Tanniinien kyvystä muodostaa saostumia alkaloidien, kardiotonisten glykosidien, raskasmetallisuolojen, niiden kanssa käytetään vastalääkkeinä myrkytystapauksissa näillä aineilla.

Ulkoisesti

• suuontelon, nielun, kurkunpään sairauksien (stomatiitti, ientulehdus, nielutulehdus, tonsilliitti) sekä
• palovammoihin käytetään tammenkuoren keitteitä, bergenian juurakoita, käärmettä, cinquefoil-juuria, juurakoita ja burnetin, tanniinin, "Altan" -juuria.

sisällä

• ruoansulatuskanavan sairauksiin (koliitti, enterokoliitti, ripuli, punatauti), tanniinivalmisteita (Tanalbin, Tansal), Altania, mustikoiden keitteitä, lintukirsikkaa (erityisesti lastenhoidossa), leppien taimia, bergenian juurakoita, käärmettä, cinquefoil, juurakot ja burnetin juuret.

Kuten hemostaattinen varoja

• Kohdun, mahalaukun ja peräpukamien verenvuotoon käytetään viburnum-kuoren keitteitä, pahanpuun juurakoita ja juuria, cinquefoil-juuria, leppätaimia.

Keitteet valmistetaan suhteessa 1:5 tai 1:10.

Älä käytä erittäin tiivistettyjä keitteitä , koska tässä tapauksessa albuminaattikalvo kuivuu, ilmaantuu halkeamia ja toissijainen tulehdusprosessi.

Kokeellisesti perustettu kasvainten vastainen aktiivisuus tanniinit granaattiomenan hedelmän siemenkalvon vesiuute (lymfosarkoomaan, sarkoomaan ja muihin sairauksiin) ja Hanerol-valmiste, joka on saatu angustifolia fireweed (pajuyrtti) -kukintojen ellagitaniinien ja polysakkaridien perusteella (vatsa- ja keuhkosyöpään) ).

Kokoelman tulos:

MENETELMÄT LÄÄKEKASVIRAAKA-AINEIDEN PARKUJIEN MÄÄRITYKSEN MÄÄRITTÄMISEKSI

Mihailova Elena Vladimirovna

cand. biol. Sci., Assistant, VSMA, nimetty V.I. N.N. Burdenko,

Voronezh

Sähköposti: milenok[sähköposti suojattu] kulkija.fi

Vasilyeva Anna Petrovna

Martynova Daria Mikhailovna

VGMA:n opiskelija. N.N. Burdenko, Voronezh

Sähköposti: darjamartynova[sähköposti suojattu] kulkija.fi

Tanniinit (DV) ovat hyvin yleinen kasvien biologisesti aktiivisten aineiden (BAS) ryhmä, jolla on erilaisia ​​farmakologisia ominaisuuksia, mikä on syy niiden laajaan käyttöön lääketieteessä. Siksi tätä biologisesti aktiivisten aineiden ryhmää sisältävien lääkkeiden ja lääkekasviraaka-aineiden (MPR) hyvän laadun määrittämisongelma on erittäin tärkeä. Yksi tärkeimmistä menetelmistä MPS:n hyvän laadun toteamiseksi on kvantitatiivinen fytokemiallinen analyysi. Tällä hetkellä on olemassa useita menetelmiä, jotka mahdollistavat tämäntyyppisen DV:tä sisältävän MPC-analyysin, mutta kirjallisuustiedot ovat hajallaan. Edellisen yhteydessä on tarpeen systematisoida DVvLRS:n kvantitatiivisen analyysin menetelmät.

Klassiset menetelmät vaikuttavien aineiden pitoisuuden määrittämiseksi ovat gravimetriset (paino) ja titrimetriset menetelmät. Gravimetrinen menetelmä perustuu aktiivisten aineiden kykyyn saostua gelatiinilla, raskasmetalli-ioneilla ja ihon (paljaalla) jauheella. Ensimmäinen vaihe on määrittää kuivan jäännöksen massa vesipitoisessa uutteessa MPC:stä. Uute kuivataan sitten vakiopainoon. Seuraava vaihe on uutteen vapauttaminen aktiivisesta ainesosasta prosessoimalla holly-jauheella. Tässä tapauksessa saostuu sakka, joka poistetaan sitten suodattamalla, määritetään uudelleen kuivan jäännöksen määrä ja aktiivisten aineiden määrä määritetään kuivan jäännöksen ilmoitettujen massojen eron perusteella.

Titrimetrisiä menetelmiä ovat:

1. Titraus gelatiiniliuoksella. Tämä menetelmä perustuu myös aktiivisten aineiden ominaisuuteen saostua proteiinien (gelatiini) vaikutuksesta. Raaka-aineista saadut vesiuutteet titrataan 1 % gelatiiniliuoksella. Tiitterin määrää puhdas tanniini. Vastaavuuspiste asetetaan valitsemalla pienin titrausainetilavuus, joka saa aikaan aktiivisten aineiden täydellisen saostumisen. Tämä menetelmä on erittäin spesifinen ja mahdollistaa todellisen DV:n sisällön määrittämisen, mutta sen suoritus on melko pitkä, ja vastaavuuspisteen määrittäminen riippuu inhimillisestä tekijästä.

2. Permanganatometrinen titraus. Tämä menetelmä on esitetty yleisessä farmakopean monografiassa, ja se perustuu DV:n helppoon hapettumiseen kaliumpermanganaatilla happamassa väliaineessa indigosulfonihapon läsnä ollessa. Titrauksen lopussa liuoksen väri muuttuu sinisestä kullankeltaiseksi. Taloudellisuudesta, nopeudesta ja toteutuksen helppoudesta huolimatta menetelmä ei ole riittävän tarkka, mikä liittyy ekvivalenssipisteen määrittämisen vaikeuteen sekä mittaustulosten yliarviointiin titrausaineen voimakkaan hapetuskyvyn vuoksi.

3. Kompleksometrinen titraus Trilon B:llä ja DV-sinkkisulfaatin alustava saostus. Menetelmää käytetään tanniinin kvantitatiiviseen määritykseen parkitussumakin ja parkitussumakin raaka-aineista. Ksylenolioranssia käytetään indikaattorina.

Fysikaalisia kemiallisia menetelmiä DV:n kvantitatiiviseen määrittämiseen lääkekasviaineissa ovat fotoelektrokolorimetrinen, spektrofotometrinen, amperometrinen menetelmä sekä potentiometrinen ja kulometrinen titrausmenetelmä.

1. Fotoelektrokolorimetrinen menetelmä. Se perustuu DI:n kykyyn muodostaa värillisiä kemiallisia yhdisteitä rauta(III)-suolojen, fosfovolframihapon, Folin-Denis-reagenssin ja muiden aineiden kanssa. Yksi reagensseista lisätään tutkittuun uutteeseen MPC:stä, stabiilin värin ilmaantumisen jälkeen optinen tiheys mitataan fotokolorimetrillä. AI:n prosenttiosuus määritetään kalibrointikäyrästä, joka on muodostettu käyttämällä sarjaa tunnetun pitoisuuden omaavia tanniiniliuoksia.

2. Spektrofotometrinen määritys. Vesipitoisen uutteen saamisen jälkeen osaa siitä sentrifugoidaan 5 minuuttia nopeudella 3000 rpm. Sentrifugiin lisätään 2-prosenttista ammoniummolybdaatin vesiliuosta, minkä jälkeen se laimennetaan vedellä ja jätetään 15 minuutiksi. Tuloksena olevan värin intensiteetti mitataan spektrofotometrillä aallonpituudella 420 nm kyvetissä, jonka kerrospaksuus on 10 mm. Tanidien laskenta suoritetaan vakionäytteen mukaan. Tanniinin GSO:ta käytetään standardinäytteenä.

3. Kromatografinen määritys. Kondensoituneiden tanniinien tunnistamiseksi saadaan alkoholi- (95 % etyylialkoholi) ja vesiuutteet ja suoritetaan paperi- ja ohutkerroskromatografia. Standardinäytteenä käytetään katekiinin GSO:ta. Erotus suoritetaan liuotinjärjestelmissä butanoli - etikkahappo - vesi (BUW) (40:12:28), (4:1:2), 5 % etikkahappo Filtrak-paperilla ja Silufol-levyillä. Aineiden vyöhykkeiden havaitseminen kromatogrammista suoritetaan UV-valossa, jonka jälkeen käsitellään 1-prosenttisella rautaammoniumalunaliuoksella tai 1-prosenttisella vanilliiniliuoksella, väkevä suolahappo. Jatkossa on mahdollista suorittaa kvantitatiivinen analyysi eluoimalla DV-levyltä etyylialkoholilla ja suorittamalla spektrofotometrinen analyysi, jossa absorptiospektri on 250-420 nm.

4. Amperometrinen menetelmä. Menetelmän ydin on mitata sähkövirtaa, joka syntyy luonnollisten fenolisten antioksidanttien –OH-ryhmien hapettumisen aikana työelektrodin pinnalla tietyssä potentiaalissa. Alustavasti rakennetaan vertailunäytteen (kversetiinin) signaalin graafinen riippuvuus sen konsentraatiosta ja tuloksena olevaa kalibrointia käyttäen lasketaan tutkittavien näytteiden fenolipitoisuus kversetiinin pitoisuuden yksiköissä.

5. Potentiometrinen titraus. Tämäntyyppinen vesipitoisen uutteen (erityisesti tammenkuoren keittäminen) titraus suoritettiin kaliumpermanganaattiliuoksella (0,02 M), tulokset tallennettiin pH-mittarilla (pH-410). Titrauksen loppupisteen määritys suoritettiin Gran-menetelmän mukaisesti käyttämällä tietokoneohjelmaa "GRAN v.0.5". Potentiometrinen titraustyyppi antaa tarkempia tuloksia, koska ekvivalenssipiste on tässä tapauksessa selkeästi kiinteä, mikä eliminoi tulosten harhaa inhimillisestä tekijästä.. Potentiometrinen titraus on erityisen tärkeä indikaattorititraukseen verrattuna värillisten liuosten tutkimuksessa. kuten AD:ta sisältävät vesiuutteet.

6. Kulonometrinen titraus. Menetelmä hiukkasmassan vaikuttavien aineosien tanniinipitoisuuden kvantitatiiviseksi määrittämiseksi kulometrisellä titrauksella on se, että raaka-aineesta saatu tutkittu uute reagoi kulometristen titraus-hypojodiitti-ionien kanssa, joita muodostuu sähköisesti tuotetun jodin disproportioinnissa emäksessä. keskikokoinen. Hypojodiitti-ionien sähkögenerointi suoritetaan kaliumjodidin 0,1 M liuoksesta fosfaattipuskuriliuoksessa (pH 9,8) platinaelektrodilla vakiovirran voimakkuudella 5,0 mA.

Siten DV:n kvantitatiiviseen määritykseen MHM:ssä käytetään sellaisia ​​menetelmiä DV:n kvantitatiiviseen määrittämiseen MHM:ssä, kuten titrimetrisiä menetelmiä (mukaan lukien titraus gelatiinilla, kaliumpermanganaatilla, kompleksometrinen titraus Trilon B:llä, potentiometrinen ja kulometrinen titraus). , fotoelektrokolorimetriset, spektrofotometriset ja amperometriset menetelmät.

Bibliografia:

1. Vasilyeva A.P. Tanniinipitoisuuden dynamiikan tutkimus tammenkuoren keittimessä varastoinnin aikana // Nuorten innovaatiotiedote. - 2012. - V. 1, nro 1. - S. 199-200.
2. Neuvostoliiton valtion farmakopea, XI painos, nro. 1. - M.: Lääketiede, 1987. - 336 s.
3. Grinkevitš N.I., L.N. Safronych Lääkekasvien kemiallinen analyysi. - M., 1983. - 176 s.
4. Ermakov A.I., Arasimovich V.V. Tanniinien kokonaispitoisuuden määrittäminen. Kasvien biologisen tutkimuksen menetelmät: Uch. Hyöty. Leningrad: Agropromizdat. 1987. - 456 s.
5. Islambekov Sh.Yu. Karimdzhanov S.M., Mavljanov A.K. Kasvistanniinit // Luonnonyhdisteiden kemia. - 1990. - nro 3. - C. 293-307.
6. Kemertelidze E.P., Yavich P.A., Sarabunovich A.G. Tanniinin kvantitatiivinen määritys // Apteekki. - 1984. Nro 4. - S. 34-37.
7. Pat. Venäjän federaatio nro 2436084 Menetelmä kasviraaka-aineiden tanniinipitoisuuden coulometriseksi määrittämiseksi; joulukuu 4.6.2010, jul. 10.12.2011. [Sähköinen resurssi]. Pääsytila. URL-osoite: http://www.freepatent.ru/patents/2436084 (käyttöpäivä: 02.12.2012).
8. Ryabinina E.I. Kemiallis-analyyttisten menetelmien vertailu kasviraaka-aineiden tanniinien ja antioksidanttiaktiivisuuden määrittämiseksi // Analyysi ja valvonta. - 2011. - V. 15, nro 2. - S. 202-204.
9. Fedoseeva L.M. Altaissa kasvavan badanin paksulehtisen maanalaisten ja maanpäällisten kasvullisten elinten tanniinien tutkimus. // Kasviraaka-aineiden kemia. - 2005. Nro 3. S. 45-50.

Patentin RU 2439568 omistajat:

Keksintö liittyy farmakologian alaan ja sitä voidaan käyttää tanniinien määrittämiseen kasvimateriaaleista. Menetelmä tanniinien määrittämiseksi kasviraaka-aineista koostuu raaka-ainenäytteen uuttamisesta vedellä keittämisen, jäähdytyksen, suodatuksen aikana, alikvootin näytteen optisen tiheyden mittaamisesta aallonpituudella 277 nm ja kaikkien tanniinien summan pitoisuuden laskemisesta. tietyn kaavan mukaan, sitten lisätään suodoksen alikvoottinäytteeseen 1-prosenttista kollageeniliuosta 1-prosenttisessa etikkahapossa ravistellaan, suodatetaan, suodoksen optinen tiheys mitataan aallonpituudella 277 nm ja saostuneen aineen pitoisuus. tanniinit lasketaan tietyllä kaavalla. Menetelmä mahdollistaa kasviraaka-aineiden tanniinipitoisuuden määritystarkkuuden lisäämisen sekä kasviraaka-aineiden saostuneiden ja saostumattomien tanniinien selektiivisen määrittämisen.

Keksintö koskee lääketeollisuutta, farmakognosian ja farmaseuttisen kemian alaa ja sitä voidaan käyttää tanniineja sisältävien kasvimateriaalien laadun säätelyyn.

Tunnettu menetelmä tanniinien määrittämiseksi lääkekasviaineista (MPM) kulometrisesti tanniinin suhteen (S. G. Abdullina ym. Tanniinien kulometrinen määritys lääkekasviaineista. // Apteekki. Nro 4. - 2010. - P. 13 - viisitoista).

Tämän menetelmän haittapuolena on lisälaitteiden (coulometri), spesifisen titrausaineen (kaliumhypojodidi) käyttö, joka hapettavien ominaisuuksien suhteen lähestyy kaliumpermanganaattia eikä mahdollista korkean ja pienen molekyylipainon tanniinien erottamista toisistaan.

Tunnetaan myös menetelmä teen tanniini- ja gallushappojohdannaisten pitoisuuden määrittämiseksi konduktometrialla (patentti nro 2127878. Menetelmä tanniinin ja katekiinien (gallushapon suhteen) erikseen määrittämiseksi teestä. M.: 1999).

Tämän menetelmän haittana on myrkyllisten orgaanisten liuottimien (isobutyylialkoholi) käyttö sekä värireaktion käyttö Fe (III) kanssa, jonka tuote on värillinen yhdiste, jonka väri on epävakaa ajan mittaan.

Tunnetaan myös menetelmä tanniinien kvantitatiiviseksi määrittämiseksi tanniinien suhteen skumpian ja sumakin lehdistä kompleksometriamenetelmällä sen jälkeen, kun tanniinit on saostettu sinkkisuoloilla (GOST 4564-79. Skumpian lehti. Tekniset tiedot; GOST 4565- 79. Sumakin lehtiä. Tekniset tiedot).

Tämän menetelmän haittana on analyysin kesto ja ekvivalenssipisteen määrittämisen vaikeus.

Tunnetaan myös menetelmä tanniinien kvantitatiiviseksi määrittämiseksi spektrofotometrisellä menetelmällä gallushapon suhteen Folin-Ciocalteu-reagenssin kanssa (Ohjeet biologisesti aktiivisten ravintolisien laadunvalvonta- ja turvallisuusmenetelmiin. Ohje. R 4.1.1672 -03. - M. - 2004 - s. 94-95).

Tämän menetelmän haittana on mahdottomuus määrittää erikseen alhaisen ja korkean molekyylipainon tanniinit.

Lähimpänä ehdotettua menetelmää on, että tanniinit määritetään spektrofotometrialla gallushapon suhteen (Ohjeet biologisesti aktiivisten ravintolisien laadunvalvonta- ja turvallisuusmenetelmiin. Ohje. R 4.1.1672-03. - M. - 2004 g. - P . 120).

Tämän menetelmän haittana on testinäytteen toistuva laimentaminen, jonka seurauksena tanniinien pitoisuus liuoksessa on huonosti määritetty. Myös tässä menetelmässä vertailuliuos on puskuriliuos, mikä vaikeuttaa analysointia. Lisäksi tällä menetelmällä ei ole mahdollista määrittää erikseen pienen molekyylipainon ja korkean molekyylipainon tanniinipitoisuutta.

Keksinnön tavoitteena on parantaa tanniinien määrityksen tarkkuutta ja saostuneiden ja saostumattomien tanniinien erillismäärityksen mahdollisuutta kasviraaka-aineista.

Ongelma ratkeaa sillä, että raaka-ainenäyte uutetaan vedellä kiehumisen aikana, jäähdytetään, suodatetaan, alikvootin näytteen optinen tiheys mitataan aallonpituudella 277 nm ja kaikkien tanniinien summan pitoisuus mitataan. lasketaan kaavalla

50 - pullon tilavuus, ml,

W - raaka-aineen kosteuspitoisuus, %,

1-prosenttinen kollageeniliuos 1-prosenttisessa etikkahapossa lisätään osaan suodosta, ravistellaan, suodatetaan, suodoksen optinen tiheys mitataan aallonpituudella 277 nm ja saostuneiden tanniinien pitoisuus lasketaan kaavalla

D 1 - liuoksen 1 optinen tiheys,

D 2 - liuoksen 2 optinen tiheys,

m nav - raaka-ainenäytteen paino, g,

V a - alikvoottinäytteen tilavuus, ml,

250 - kokonaisuuttotilavuus, ml,

50 - pullon tilavuus, ml,

508 - gallushapon spesifinen absorptioindeksi (gallushapon 1-prosenttisen liuoksen optinen tiheys 1 mg / ml),

W - raaka-aineen kosteuspitoisuus, %.

Käytännössä menetelmä suoritetaan seuraavasti. Noin 2,0 (tarkasti punnittua) murskattua raaka-ainetta, jotka seulotaan 3 mm:n reiän läpi, laitetaan 500 ml:n pulloon, kaadetaan 250 ml kiehumispisteeseen kuumennettua vettä ja keitetään 30 minuuttia palautusjäähdyttäen satunnaisesti sekoittaen. Jäähdytä huoneenlämpötilaan, laimenna vedellä 250 ml:ksi, suodata vanun läpi, jotta raaka-ainehiukkaset eivät pääse vesiuutteeseen. Ensimmäiset 50 ml suodosta heitetään pois.

1-4 ml vesiuutetta laitetaan 50 ml:n mittapulloon, säädetään vedellä merkkiin (liuos 1). Mittaa liuoksen 1 optinen tiheys aallonpituudella 277 nm. Vertailuna käytetään vettä.

30 ml vesiuutetta laitetaan 50 ml:n mittausastiaan, lisätään 2-10 ml saostusreagenssia, ravistellaan 30-60 minuuttia, lasketaan, suodatetaan. 1-4 ml tuloksena olevaa suodosta siirretään 50 ml:n pulloon, joka säädetään vedellä merkkiin (liuos 2). Mittaa liuoksen 2 optinen tiheys aallonpituudella 277 nm. Vertailuna käytetään vettä.

Keksintöä havainnollistetaan seuraavilla esimerkeillä.

Esimerkki 1. Analyysissä otetut kasviraaka-aineet - tammenkuori.

Noin 2,0 (tarkasti punnittua) murskattua raakaa tammenkuorta, seulotaan 3 mm:n reiän läpi, laitetaan 500 ml:n pulloon, kaadetaan 250 ml:lla kiehuvaksi lämmitettyä vettä ja keitetään 30 minuuttia palautusjäähdyttäen satunnaisesti sekoittaen . Jäähdytä huoneenlämpötilaan, laimenna vedellä 250 ml:ksi, suodata vanun läpi, jotta raaka-ainehiukkaset eivät pääse vesiuutteeseen. Ensimmäiset 50 ml suodosta heitetään pois.

2 ml tammenkuoren vesiuutetta laitetaan 50 ml:n mittapulloon, joka on säädetty vedellä merkkiin (liuos 1). Mittaa liuoksen 1 optinen tiheys aallonpituudella 277 nm. Vertailuna käytetään vettä. D 1 tammen kuorelle on 0,595.

30 ml vesiuutetta laitetaan 50 ml:n tilavuussäiliöön, lisätään 2 ml saostusreagenssia, ravistellaan 30 minuuttia, asetetaan, suodatetaan. 2 ml saatua suodosta siirretään 50 ml:n pulloon, joka säädetään vedellä merkkiin (liuos 2). Mittaa liuoksen 2 optinen tiheys aallonpituudella 277 nm. Vertailuna käytetään vettä. D 2 tammen kuorelle on 0,276.

Esimerkki 2. Analyysiä varten otettiin kiemurtelevan juurakon kasvimateriaali.

Noin 2,0 (tarkasti punnittua) käärmejuurakon murskattua raaka-ainetta, joka on seulottu 3 mm:n reiän läpi, laitetaan 500 ml:n pulloon, kaadetaan 250 ml kiehuvaksi lämmitettyä vettä ja keitetään. 30 minuuttia palautusjäähdyttäen satunnaisesti sekoittaen. Jäähdytä huoneenlämpötilaan, laimenna vedellä 250 ml:ksi, suodata vanun läpi, jotta raaka-ainehiukkaset eivät pääse vesiuutteeseen. Ensimmäiset 50 ml suodosta heitetään pois.

1 ml vesipitoista uutetta kierukan juurakosta laitetaan 50 ml:n mittapulloon, joka on säädetty vedellä merkkiin (liuos 1). Mittaa liuoksen 1 optinen tiheys aallonpituudella 277 nm. Vertailuna käytetään vettä.

30 ml vesiuutetta laitetaan 50 ml:n mittausastiaan, lisätään 7 ml saostusreagenssia, ravistellaan 60 minuuttia, lasketaan, suodatetaan. 1 ml saatua suodosta siirretään 50 ml:n pulloon, joka säädetään vedellä merkkiin (liuos 2). Mittaa liuoksen 2 optinen tiheys aallonpituudella 277 nm. Vertailuna käytetään vettä.

Ehdotettu menetelmä parantaa kasviraaka-aineiden tanniinipitoisuuden määrityksen tarkkuutta ja määrittää valikoivasti saostuneet ja saostumattomat tanniinit kasviraaka-aineista.

Menetelmä kasviraaka-aineiden tanniinien määrittämiseksi gallushapon suhteen, jossa raaka-ainenäyte uutetaan vedellä keittämisen, jäähdytyksen, suodatuksen aikana, mitataan alikvootin näytteen optinen tiheys aallonpituudella 277 nm ja lasketaan kaikkien tanniinien summan pitoisuus kaavan mukaan:

missä x a - tanniinien summan pitoisuus gallushapon muodossa, %;




50 - pullon tilavuus, ml;
508 - gallushapon spesifinen absorptioindeksi (gallushapon 1 % liuoksen optinen tiheys 1 mg/ml);
W - raaka-aineen kosteuspitoisuus, %,
1-prosenttinen kollageeniliuos 1-prosenttisessa etikkahapossa lisätään osaan suodosta, ravistellaan, suodatetaan, suodoksen optinen tiheys mitataan aallonpituudella 277 nm ja saostuneiden tanniinien pitoisuus lasketaan kaavalla :

jossa X on saostuneiden tanniinien pitoisuus gallushapon muodossa, %;
D 1 - liuoksen 1 optinen tiheys;
D2 - liuoksen 2 optinen tiheys;
m nav - raaka-ainenäytteen massa, g;
V a - alikvoottinäytteen tilavuus, ml;
250 - uuton kokonaistilavuus, ml;
50 - pullon tilavuus, ml;
508 - gallushapon spesifinen absorptioindeksi (gallushapon 1-prosenttisen liuoksen optinen tiheys 1 mg/ml);
W - raaka-aineen kosteuspitoisuus, %.

Samanlaisia ​​patentteja:

Keksintö liittyy lääketieteeseen, nimittäin psykoneurologiaan, ja kuvaa menetelmän neurologisten toimintojen palautumisen ennustamiseksi potilailla iskeemisen aivohalvauksen akuutissa jaksossa suorittamalla kliinisiä ja biokemiallisia tutkimuksia albumiinin (TAC) kokonaispitoisuudesta veren seerumissa grammoina /l, jossa lisäksi 5-7 mennessä Sairauspäivänä määritetään albumiinin efektiivinen pitoisuus (ECA), lasketaan albumiinin sitoutumisreservi (ARA) ja jos tämä indikaattori on pienempi kuin yksi, negatiivinen tulos. ennustetaan neurologisten toimintojen palautumista potilailla iskeemisen aivohalvauksen akuutissa jaksossa.

Keksintö liittyy lääketieteeseen, onkologian biologiseen tutkimukseen, ja sitä voidaan käyttää aivokasvainten pahanlaatuisen prosessin kehittymisen määrittämiseen kirurgisen hoidon jälkeen.

Keksintö liittyy lääketieteen alaan, erityisesti onkologiaan, ja kuvaa menetelmää virtsarakon syövän neoadjuvanttikemoterapian tehokkuuden arvioimiseksi potilasta tutkimalla, jossa mitataan kasvainkudoksen autofluoresenssin maksimiintensiteetti spektrin vihreällä alueella. primaarisen diagnoosin vaiheessa ja 1 kuukausi preoperatiivisen kemoterapian jälkeen ja kasvainkudoksen autofluoresenssin maksimiintensiteetin kasvaessa potilaan arvoissa 15 % alkuperäisestä ja enemmän, hoidon tehokkuus arvioidaan osittaiseksi. kasvainprosessin regressio, jos kasvainkudoksen autofluoresenssin intensiteetissä ei ole muutoksia alkuperäisistä, prosessin stabiloituminen määritetään, kun kasvainkudoksen autofluoresenssin intensiteetti vähenee 15% ja enemmän alkuperäisestä huomiosta kasvainprosessin eteneminen.